一种尾巨桉的组培快繁方法与流程

本发明属于植物培养领域，涉及尾巨桉无性繁殖育苗方法，尤其涉及尾巨桉的组培快繁方法。背景技术：1、尾巨桉（ eucalyptus urophyla ×  e.grandis）是尾叶桉与巨桉杂交的速生树种，它既具有尾叶桉适应性和抗病能力强的特点，又具有巨桉生长快和纸浆率高的优点，是理想的造纸和人造板树种。尾巨桉生长快，产量高，一般造林5-7a就可以采伐利用，经济效益较为显著。近些年来，我国桉树人工工业原料林的发展十分迅猛，种植规模不断扩大，营造尾巨桉林的积极性空前高涨，尾巨桉苗木需求量剧增。 2、桉树杂交品系组培体系很多，但桉树不同品系间组培体系差异还是比较大，不同单株尤其是优良单株的组培体系基本需要重新建立。因此受限于组培快繁技术，尾巨桉良种一直无法形成规模化生产，未被广泛推广种植。技术实现思路1、本发明为了克服上述现有技术不足，提供一种针对尾巨桉优良种质，能提高组培生根率和移栽成活率的尾巨桉的组培快繁方法。2、本发明采用的技术方案如下：3、一种尾巨桉的组培快繁方法，选择无病虫害的尾巨桉优良单株进行环割促萌，当萌芽条长至30～35cm时，剪取木质化茎段获取外植体并进行外植体消毒处理，按顺序依次进行诱导培养、继代培养、壮苗培养和生根培养，最后将生根完全、苗高4-6cm的生根瓶苗洗净培养基并移栽至装有基质的营养杯内；4、主要步骤包括：5、（1）环割促萌6、选择无病虫害的尾巨桉优良单株，铲除周围杂灌，于环割前一天喷洒1%高锰酸钾消毒，在离地20cm处环割树周长3/4，宽度3cm，刮尽形成层至韧皮部，喷洒促萌营养液至韧皮部；7、（2）外植体消毒8、当萌芽条长至30～35cm时，剪取半木质化茎段，用洗衣粉溶液洗涤10min，再用自来水冲洗5min；带至超净工作台，切成2～3cm、1～2个潜伏芽的小段放入无菌瓶，75%酒精浸泡30s，无菌水清洗3次，2%次氯酸钠浸泡3min，无菌水清洗3次；9、（3）诱导培养10、用灭菌滤纸吸干步骤（2）处理后的小段的表面水分，切除小段两端，接种至诱导培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度1500-2000lux条件下培养20-25天；11、（4）继代培养12、切取步骤（3）获得的无菌芽转入继代培养基，在温度25±2℃，暗培养5d后，光照12h/d，光照强度1500-2000lux条件下培养20-25天；13、（5）壮苗培养14、将步骤（4）获得的丛芽分切至壮苗培养基，在温度25±2℃，光照12h/d，光照强度2000-2500lux条件下培养15-20天；15、（6）生根培养16、当经步骤（5）壮苗培养获得的芽苗长至3-4cm，切取芽苗转入生根培养基，在温度25±2℃，暗培养5d后，光照12h/d，光照强度1500-2000lux条件下培养20-25天；17、（7）移栽18、将生根完全、苗高4-6cm的生根瓶苗洗净培养基并移栽至装有基质的营养杯内，淋透基质，覆盖薄膜保湿并盖上遮荫网，用多菌灵500～600倍液每5～7 d喷施一次防治根腐病；10天后打开遮荫网和薄膜，每10天喷洒一次叶面营养液。19、优选的，以上步骤（1）所述的促萌营养液的原料组分为1l溶液含152mgkno3、132mgnh4no3、13.6mgkh2po4、26.56mgcacl2、29.6mgmgso4、0.1mgn6苄基腺嘌呤(6-ba)、0.2mg萘乙酸(naa)。20、优选的，以上步骤（3）所述的诱导培养基的原料组分为：1l诱导培养基含1520mgkno3、1320mgnh4no3、136mgkh2po4、265.6mgcacl2、296mgmgso4、6.2mgh3bo3、22.6mgmnso4、8.6mgznso4、0.25 mgna2moo4、0.025mgcuso4、0.025mgcocl2、0.83mgki、1000mgpvp、0.24mg生物素(vh)、100mgl-半胱氨酸、2.4mgd-泛酸钙(vb5)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(vb3)、2mg硫胺素(vb1)、0.5mg吡哆素(vb6)、37.3mg na2-edta、27.8mg feso4、100mg肌醇、0.3-0.5mgn6苄基腺嘌呤(6-ba)、0.1-0.2mg萘乙酸(naa)、30g蔗糖、5g琼脂粉、ph值5.8~6。21、优选的，以上步骤（4）所述的继代培养基的原料组分为为：1l继代培养基含1520mgkno3、1320mgnh4no3、136mgkh2po4、265.6mgcacl2、296mgmgso4、6.2mgh3bo3、22.6mgmnso4、8.6mgznso4、0.25 mgna2moo4、0.025mgcuso4、0.025mgcocl2、0.83mgki、0.24mg生物素(vh)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(vb3)、2mg硫胺素(vb1)、0.5mg吡哆素(vb6)、37.3mg na2-edta、27.8mg feso4、100mg肌醇、0.4-0.6mgn6苄基腺嘌呤(6-ba)、0.2-0.3mg萘乙酸(naa)、30g蔗糖、5g琼脂粉、ph值5.8~6。22、优选的，以上步骤（5）所述的壮苗培养基原料组分为：1l壮苗培养基含1520mgkno3、1320mgnh4no3、136mgkh2po4、265.6mgcacl2、296mgmgso4、6.2mgh3bo3、22.6mgmnso4、8.6mgznso4、0.25 mgna2moo4、0.025mgcuso4、0.025mgcocl2、0.83mgki、0.24mg生物素(vh)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(vb3)、2mg硫胺素(vb1)、0.5mg吡哆素(vb6)、37.3mg na2-edta、27.8mg feso4、100mg肌醇、0.1-0.3mgn6苄基腺嘌呤(6-ba)、0.3-0.5mg萘乙酸(naa)、30g蔗糖、5g琼脂粉、ph值5.8~6。23、优选的，以上步骤（6）所述生根培养基的原料组分为为：1l生根培养基含246mgkno3、335mgkh2po4、250mgca(no3)2、76mgcacl2、258mgmgso4、3.1mgh3bo3、11.15mgmnso4、4.3mgznso4、0.125mgna2moo4、0.0125mgcuso4、0.0125mgcocl2、0.415mgki、0.24mg生物素(vh)、100mgl-半胱氨酸、2.4mgd-泛酸钙(vb5)、2mg甘氨酸、5mg烟酸(vb3)、2mg硫胺素(vb1)、0.5mg吡哆素(vb6)、37.3mg na2-edta、27.8mg feso4、100mg肌醇、0.3-0.5mg吲哚丁酸(iba)、0.2-0.3mg萘乙酸(naa)、0.3-0.5mg多效唑(pp333)、30g蔗糖、5g琼脂粉、5g活性炭、ph值5.8~6。24、优选的，以上步骤（7）所述的基质为由椰糠：炭化谷壳：泥炭土：黄心土按重量比为5：2.5：2：0.5混合，加入钙镁磷肥4 kg/m3混匀，盖上薄膜堆沤一个月制成的轻型基质；所述的叶面营养液的原料组分为：1l叶面营养液含152mgkno3、132mgnh4no3、13.6mgkh2po4、26.56mgcacl2、29.6mgmgso4。25、优选的，以上步骤（1）所述的优良单株为尾巨桉ge19-2品种。尾巨桉ge19-2品种的亲本为尾叶桉与巨桉人工杂交培育的f1代杂交种无性系，是通过对f1代杂交种造林测定后选择优良单株进行无性繁殖而来，是经广西壮族自治区林木品种审定委员会审定的林木良种，综合了母本尾叶桉和父本巨桉的优良特性，具有生长快、产量高、干形通直、抗虫（桉小卷叶蛾等）能力较强等优良特性，5.5年生林分平均胸径达15.4cm，平均树高20.9m，年平均蓄积生长量47.0m³/hm2；其木材主要作胶合板、纤维板、纸浆、锯材及建筑等用。26、本发明具有的优点及有益效果如下：27、1、本发明采用的环割促萌方式获取材料，减少了对原材料的破坏，能有效保留尾巨桉优良种质的同时实现尾巨桉无性系高效开发。28、2、本发明的在诱导培育和继代培养的基础上，生根培养基减少了大量元素和部分微量元素的使用，通过不同元素之间的搭配，尤其是采用了多效唑(pp333)和活性炭，显著提升尾巨桉生根效率，最终瓶内生根率可达95%以上。29、3、本发明在移栽时选用特定的基质和叶面营养液，保证了尾巨桉生长、成活所需的营养全面、足量，有效提高尾巨桉组培苗移栽成活率，移栽成活率可达95%以上，减少材料损失，可促进尾巨桉规模化生产。30、4、桉树杂交品系组培体系很多，但桉树不同品系间组培体系差异还是比较大，不同单株尤其是优良单株的组培体系基本需要重新建立，本发明建立了尾巨桉优良单株的组培体系，促进了尾巨桉组培苗工厂化生产的发展，有利于将尾巨桉良种推广种植，具有良好的经济效益和生态效益。