一种抗涝、抗盐碱大樱桃砧木苗的组培脱毒快繁

本发明属于植物人工繁殖，具体涉及一种抗涝、抗盐碱大樱桃砧木苗的组培脱毒快繁方法。背景技术：1、大樱桃砧木兰丁2号，为北京市农林科学院林果所进行远源杂交所得。2014年申请审定并通过，和其他砧木相比较，有以下优点：树势生长旺盛、根系深且发达、根孽少、固地性好；抗涝性强、较抗盐碱、抗褐斑病、耐根瘤病、土壤适应性强；嫁接亲和力好、大小脚现象不明显，嫁接树树势开张、幼树成花早、早果性较好、丰产稳产、树势较强，树冠半圆形，是应用范围比较广泛和优良的砧木。2、大樱桃砧木兰丁2号在河北应用比较广泛，在甘肃天水比较缺乏，应用比较少，需要提前预定和长途运输，这样无形中造成苗木成本上涨，苗木价格较高。近年来，随着科学技术的迅猛发展，植物组织培养技术已进入生产应用阶段，广泛应用于花卉、果树苗木的大规模离体快繁。植物组培脱毒快繁在人工控制条件下一年四季生产，并可在短时间内获得大量组培脱毒苗木。因此，开展大樱桃砧木苗组培脱毒快繁相关试验研究具有重要意义。技术实现思路1、本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种抗涝、抗盐碱大樱桃砧木苗的组培脱毒快繁方法，应用植物脱毒快繁的方法，可短期内获得大量大樱桃砧木兰丁2号脱毒苗，经嫁接后供应市场，可解决河滩地、盐碱地栽植大樱桃的需求，使大樱桃的栽植范围更广泛。2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种抗涝、抗盐碱大樱桃砧木苗的组培脱毒快繁方法，包括以下步骤：3、s1、初代培养4、11月份，2-5年生大樱桃砧木兰丁2号自然落叶后剪取一年生枝条，流水进行表面清洗后，插入玻璃培养瓶，在人工恒温箱中给予温度22℃，光照2000-2400lx，进行水培培养，待新芽长到2cm，采集顶芽和下面的第一侧芽的带芽茎段装入干净培养瓶中，放入组培室，将带芽茎段在体积浓度为1‰的84消毒液中浸泡5-10min后在流水下冲洗2-6min，然后放入洗洁精稀释液中清洗10-15min，然后放入脱脂纱布中流水冲洗1-2h，在超净工作台上用体积浓度为75％的酒精中浸泡10-25ms后用无菌水冲洗2-3次，然后在体积浓度为0.1％的升汞溶液中处理1.5-3min，处理完成后移到无菌水中冲洗4-6次，然后切0.4-0.5cm带芽茎段，用无菌滤纸吸干水分，转接到装有初代培养培养基的培养瓶中，每瓶接2个带芽茎段，移入培养室，培养温度为21-23℃，湿度为60-70％，先暗培养7-10天，再在光照为2000-2400lx的条件下培养15-20天，得到无菌系瓶苗；5、所述初代培养培养基配方为改良f14培养基、0.2-0.6mg/l 6-苄基腺嘌呤(6-ba)、0.02-0.1mg/l吲哚丁酸(iba)、10-20g/l活性炭、20g/l白砂糖和5g/l琼脂，ph为5.6；6、所述改良f14培养基由大量元素、微量元素和有机物组成，大量元素为硝酸铵480mg/l、硝酸钾220mg/l、七水硫酸镁360mg/l、磷酸二氢钾240mg/l、四水硝酸钙1000mg/l；微量元素为硫酸锰0.67mg/l、七水硫酸锌0.86mg/l、二水钼酸钠0.25mg/l、硼酸12.4mg/l、碘化钾0.08mg/l、五水硫酸铜0.025mg/l、六水氯化钻0.025mg/l、edta-na227.8mg/l、七水硫酸铁37.3mg/l；有机物为甘氨酸2mg/l、吡多素1mg/l、烟酸1mg/l、硫胺素0.8mg/l、肌醇100mg/l；7、s2、扩繁继代8、将s1初代培养成活的无菌系瓶苗进行扩繁，选取生长健壮、整体度一致的芽转接到扩繁培养基中，每瓶接4个芽，移入培养室，培养温度为21-23℃，湿度为60％-70％，先暗培养7-10天，再在光照为2000-2400lx的条件下培养20-35天，得到丛生芽无菌系材料；9、所述扩繁培养基配方为改良f14培养基、0.60mg/l 6-苄基腺嘌呤(6-ba)、0.06-0.12mg/l萘乙酸(naa)，0.06-0.12mg/l赤霉素(ga3)，20g/l白砂糖和5g/l琼脂，ph为5.6；10、s3、脱毒11、将s2扩繁继代培养的丛生芽无菌系材料，剪取新芽0.4-0.6cm进行二次扩繁继代转接，转接到s2所述的扩繁培养基，每瓶接4株，具体为：先在22-25℃条件下培养15-20天，然后转移到人工气候箱中后分别给予每天光照培养14h、暗培养10h，前10-15天人工气候箱暗培养从26℃开始，每天温度升高1℃，升温至32℃后不在升温，保持32℃不变；光照培养从26℃开始，每天温度升高1℃，升温至36-38℃后温度保持不变，后20天人工气候箱光照培养在35-38℃进行，暗培养在32℃的温度下进行，培养完成后从材料嫩梢上剥取0.4-0.5mm茎尖进行转接培养14-21天，然后进行第二次剥茎尖，剥取0.4-0.5mm茎尖培养35-45天时，剪取2.0-4.0cm的芽，进行病毒检测，获得脱毒试管苗按照s2的方法做脱毒试管苗的扩繁继代；12、s4、扦插生根13、s401、将扩繁35-45天的脱毒试管苗扩繁材料，用镊子从培养瓶中取出，切去基部愈伤组织，剪取长2.0-3.0cm的单株茎段，摘去基部2-5片小叶，装入容器中喷水封口备用；14、s402、准备营养钵，放入基质，加入生根营养液；15、s403、把剪好的试管苗按2×2cm间距插入营养钵内基质中，基质湿度为60-80％，插满后用白色塑料薄膜覆盖整盘营养钵，使小苗置于营养钵内较封闭的空间中，进行生根培养；16、s404、培养15-20天后，观察生根情况，当小苗基部生出丛状根时，揭去塑料膜，将营养钵移至地面遮荫培养，湿度保持在85％以上管理；17、s405、培养40-60天后，营养钵中的小苗叶片变绿变厚，根系加速生长时，将小苗单株移入蛭石和腐熟有机肥中，按时浇透水，使苗木逐渐适应露地生长环境，等小苗长到5-10cm时，带土移入大田，参照大田育苗方法管理。18、优选地，s1所述洗洁精稀释液是在1000ml水中加入2-3ml洗洁精，混合均匀。19、优选地，s1所述在体积浓度为0.1％的升汞溶液中处理1.5-3min是将带芽茎段浸泡于体积浓度为0.1％的升汞溶液中，让药液没过材料1-2cm，并且用镊子不停搅拌，让药液均匀到达材料表面，充分杀死材料表面的各种菌类。20、优选地，s402中所述扦插生根的基质为蛭石和珍珠岩，质量比为8：2。21、优选地，s402中所述扦插生根的生根营养液为：将生根粉25g兑水10kg，然后再加入100ml改良f14培养基大量成分母液；所述改良f14培养基大量成分母液为所述改良f14培养基配方的50倍浓度。22、优选地，s405中所述蛭石与腐熟有机肥的质量比为1：0.5。23、本发明与现有技术相比具有以下突出优点：24、1、本发明提供了一种抗涝、抗盐碱大樱桃砧木苗的组培脱毒快繁方法，采用改良f14培养基，新芽萌发快，几乎不停长，叶片嫩绿，扩繁效果好，且大樱桃砧木苗一致性较高，长势良好，可以在短期内获得大量的大樱桃砧木兰丁2号脱毒试管苗，经嫁接后供应市场，能有效解决河滩地、盐碱地栽植大樱桃的需求。25、2、脱毒温度太低时，会导致脱毒不彻底，病毒脱毒率低；本发明的脱毒温度和时间能保证在脱除病毒的同时保留无病毒茎尖数量，有利于后期繁殖和开展病毒检测试验。另外，扦插基质不适合容易造成苗子发霉，生根率低；本发明采用的基质配方和营养液能促进大樱桃砧木苗生长势好，生根率高，提高了生产效率，达到了节本增效的目的。26、下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。