一种草莓茎尖脱毒苗复壮培养基的制作方法

本发明涉及草莓组培苗复壮和降低细菌污染，具体是一种草莓茎尖脱毒苗复壮培养基配方。背景技术：1、草莓（ fragaria ananassaduch.），是一种多年生的草本植物。在分类学上隶属于蔷薇科（rasaceae）草莓属（ fragarial.）。果形优美、色泽鲜艳、果味甜美、营养丰富且具有很高的观赏价值。 2、传统的田间自育的育苗方式导致病害增加、植株矮化、叶片退绿、繁殖系数降低等种苗质量退化等问题。而草莓茎尖组织脱毒快繁技术因其培养周期短、不受地域限制和易于规模化生产的特点，成为了解决传统育苗方式导致种苗退化问题的有效方法。3、草莓茎尖组织扩繁培育脱毒苗包括启动培养、继代培养和生根培养三个阶段，其中继代培养是扩大种苗量的关键步骤，此阶段种苗的分化、生长速度和质量决定着后期向田间的种苗供应产量和质量。但组培苗的反复继代会引起退化现象，例如分化率降低、植株玻璃化、矮小、叶片退绿等一系列不良现象，也会造成细菌、真菌污染率的增加并随着继代次数的增殖而蔓延，最终使组培扩繁不能持续。4、常规针对继代草莓组培苗退化或发生大面积细菌感染的处理方法是重新进行从启动培养到生根培养的完整周期过程，但获取新的外植体不能保证具备原草莓品种的优良遗传性状，所以从保存优良种质基因资源的角度，对产生退化和细菌污染的草莓继代苗进行复壮至关重要。技术实现思路1、本发明目的在于：提供一种草莓茎尖脱毒苗复壮培养基配方，可以对继代过程中发生退化的种苗进行复壮，提高草莓脱毒苗的生长势和增值系数，保证种苗的质量和产量并降低污染率。2、本发明的另一目的在于：提供一种针对上述草莓继代组培苗复壮培养基的配制和使用方法。3、本发明通过下述方案实现：一种草莓茎尖脱毒苗复壮培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素配成的营养液与其他物质混合，配方如表1。4、本发明是在1/2ms和ms培养基的基础上，通过对激素浓度和比例以及椰汁的添加量进行正交实验设计所获得的一种草莓脱毒苗继代复壮培养基，此外通过单因素实验获得了培养基的最佳白砂糖添加量。与基本的1/2ms和ms培养基相比，本配方按一定比例添加了椰汁并调整了壮苗过程中细胞分裂素和生长素的浓度。5、本发明与现有技术相比，优势在于在脱毒组培苗复壮培养基中添加椰汁并获得了最佳添加量，解决了组培苗因多次继代导致内源激素紊乱而出现玻璃化和生长畸形等问题，同时提供了壮苗条件下的最佳配比激素，不但解决了草莓多品种的种苗退化问题，而且经反复继代显著降低了细菌污染率。6、本发明还提供了上述草莓继代组培苗复壮培养基的使用方法，将受细菌感染且生长势弱的脱毒草莓试管苗用镊子将轻轻夹出，用剪刀将小苗的老叶、污染的基部剪去，只留大约0.5 cm长的叶柄，然后将单株分开，将叶柄朝上放到复壮培养基上，修剪的总体原则为“三叶一心”。经过40-45 d培养，小苗长到3-5 cm高的叶丛时，完成第一次复壮培养；然后再将经一次复壮的组培苗切去老叶及基部根系，转入复壮培养基进行第二次复壮培养，如此反复继代培养3-4次，恢复种苗生长势，起到壮苗作用，细菌感染比例可降低60% 以上。7、表1 草莓继代组培苗复壮培养基配方8、9、在上述方案基础上，培养具体条件为：培养温度20-25 ℃，光照强度1000-2000lux，每日光照时间为12-14小时，培养40-45天，完成第一次复壮培养；然后再将经一次复壮的组培苗切去老叶及基部根系，转入复壮培养基进行第二次复壮培养，如此反复继代培养3-4次。10、本发明优越性在于：提供了一种改善草莓组培苗多次继代培养导致退化现象的复壮培养基配方，特点是调整了激素浓度并添加了一定的其他物质即椰汁。试管苗恢复长势，种苗健壮且分化率高，叶片浓绿，可用于草莓‘章姬’‘红颜’‘艳丽’‘雪里香’等诸多品种并经多次继代表明显污染率降低60%以上。技术特征：1.一种草莓茎尖脱毒苗复壮培养基，包括大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素配成的营养液及其他物质混合，其特征在于：2.根据权利要求1所述的培养基制备方法，其特征在于，所述大量元素配制为20倍的浓缩液，所述微量元素、铁盐和有机物均配制为100倍的浓缩液。3.根据权利要求2所述的培养基制备方法，其特征在于，所述大量元素配制时，将二水氯化钙单独配制成20倍的浓缩液；所述铁盐配制时，先将二水乙二胺四乙酸二钠加热彻底溶解后，再将七水硫酸亚铁缓慢倒入充分熬合3-5分钟，直至溶液呈现黄色。4.根据权利要求1所述的培养基制备方法，其特征在于，分别用15 ml无水乙醇溶解0.05 g的6-ba和0.05 g的iba后，再分别添加无菌水定容到100 ml，配置成浓度为0.5 g/l的6-ba和iba浓缩液。5.根据权利要求1所述的培养基制备方法，其特征在于，所述氢氧化钠和盐酸溶液用来调节所述培养基的ph值，所述ph值5.80 ± 0.05。技术总结本发明描述了一种改善草莓组培苗因多次继代培养导致退化现象的复壮培养基配方。该复壮培养基包括大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素配成的营养液及其他物质。所述大量元素为：硝酸钾1.9 g/L、硝酸铵1.65 g/L、磷酸二氢钾0.17 g/L、七水硫酸镁0.37 g/L、二水氯化钙0.44 g/L，所述微量元素为：一水硫酸锰22.3 mg/L、硼酸6.2 mg/L、七水硫酸锌8.6 mg/L、碘化钾0.83 mg/L、二水钼酸钠0.25 mg/L、六水氯化钴0.025 mg/L、五水硫酸铜0.025 mg/L，所述铁盐为：七水硫酸亚铁27.8 mg/L、二水乙二胺四乙酸二钠37.3 mg/L，所述有机物为：肌醇100 mg/L、烟酸0.5 mg/L、甘氨酸2 mg/L、盐酸吡哆醇0.5 mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L，所述激素为细胞分裂素6‑BA浓度0‑0.4 mg/L和生长素IBA浓度0‑0.2 mg/L，所述其他物质为椰汁，在培养基中的添加量为0‑20%。技术研发人员：赵雅欣,邱振鲁,崔刚,徐波,李红燕,张敏娟,崔传芹受保护的技术使用者：山东普朗特农业技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/5/12