一种昆虫病原线虫的低温储藏方法

本发明涉及昆虫防治，特别是涉及一种昆虫病原线虫低温储藏方法。背景技术：1、昆虫病原线虫作为生物杀虫剂，已经用来防制多种重要的经济害虫。现在已有30多个种的的多个品系的供生产应用。这些线虫的品系具有防治有害昆虫的能力，但品系之间防治效果变异较大。反复的传代培养昆虫病原线虫会引起一些优良性状丢失，并导致控制病虫害的能力下降。因此，为了更好地利用昆虫病原线虫这一非常有前的天敌生物，挖掘和保存已证明有很好的生物防治潜力的重要昆虫病原线虫遗传资源，显得尤为重要。技术实现思路1、本发明的目的是针对现有技术中存在的昆虫病原线虫传代培养丢失优良形性状的技术缺陷，而提供一种昆虫病原线虫低温储藏方法。2、为实现本发明的目的所采用的技术方案是：3、一种昆虫病原线虫低温储藏方法，包括以下步骤：将昆虫病原线虫置于保护剂溶液中孵育，孵育完成中过滤昆虫病原线虫，于液氮中冷冻储藏保存。4、在上述技术方案中，所述保护剂溶液为乙二醇、丙二醇或丙三醇的水溶液。5、在上述技术方案中，所述保护剂溶液中乙二醇、丙二醇或丙三醇的体积分数为5-20％。6、在上述技术方案中，所述孵育的时间为30min-1h，孵育温度为室温，孵育时，保护剂渗透至体内，冷冻的时候不会结冰晶。7、在上述技术方案中，孵育前，先将昆虫病原线虫的粉剂置于水中，每μl水中添加1000-3000条昆虫病原线，得到昆虫病原线虫悬液，然后加入乙二醇、丙二醇或丙三醇的水溶液，使其达到预设的体积分数，然后进行孵育。8、在上述技术方案中，孵育完成后离心，将线虫悬液吸附在滤纸片上，将吸附线虫的滤纸片放入液氮中冷冻至滤纸片周围无明显气泡产生，将冷冻过的滤纸片迅速加到液氮预冷过的冻存管中，并将冻存管迅速放入液氮中储藏保存。9、在上述技术方案中，需要解冻使用时，将吸附线虫的滤纸片从冻存管中迅速去除，置于30℃的水中解冻。10、与现有技术相比，本发明的有益效果是：11、线虫在保护剂中的预培养，预培养可以减少细胞内和细胞外冰晶的形成。液氮储存可以减少因传代培养导致的昆虫病原线虫优良生物防治性状的改变和毒力丧失。储存后的线虫可以通过快速溶解复苏。技术特征：1.一种昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，包括以下步骤：将昆虫病原线虫置于保护剂溶液中孵育，孵育完成中过滤昆虫病原线虫，于液氮中冷冻储藏保存。2.如权利要求1所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，所述保护剂溶液为乙二醇、丙二醇或丙三醇的水溶液。3.如权利要求1所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，所述保护剂溶液中乙二醇、丙二醇或丙三醇的体积分数为5-20％。4.如权利要求1所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，所述孵育的时间为30min-1h，孵育温度为室温，孵育时，保护剂渗透至体内，冷冻的时候不会结冰晶。5.如权利要求1所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，孵育前，先将昆虫病原线虫的粉剂置于水中，每μl水中添加1000-3000条昆虫病原线，得到昆虫病原线虫悬液，然后加入乙二醇、丙二醇或丙三醇的水溶液，使其达到预设的体积分数，然后进行孵育。6.如权利要求5所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，孵育完成后离心，将线虫悬液吸附在滤纸片上，将吸附线虫的滤纸片放入液氮中冷冻至滤纸片周围无明显气泡产生，将冷冻过的滤纸片迅速加到液氮预冷过的冻存管中，并将冻存管迅速放入液氮中储藏保存。7.如权利要求5所述的昆虫病原线虫的低温储藏方法，其特征在于，需要解冻使用时，将吸附线虫的滤纸片从冻存管中迅速去除，置于30℃的水中解冻。技术总结本发明公开了一种昆虫病原线虫低温储藏方法，包括以下步骤：将昆虫病原线虫置于保护剂溶液中孵育，孵育完成中过滤昆虫病原线虫，于液氮中冷冻储藏保存。所述保护剂溶液为乙二醇、丙二醇或丙三醇的水溶液。预培养可以减少细胞内和细胞外冰晶的形成。液氮储存可以减少因传代培养导致的昆虫病原线虫优良生物防治性状的改变和毒力丧失。储存后的线虫可以通过快速溶解复苏。技术研发人员：阮维斌,金欣颖,于真琦受保护的技术使用者：南开大学技术研发日：技术公布日：2024/5/10