一种橡胶树三倍体无性系品种体胚植株的培育方

本发明涉及橡胶树种苗培育，具体是一种橡胶树三倍体无性系品种体胚植株的培育方法。背景技术：1、橡胶树体胚植株因具有完整根系、定植后生长快、林相整齐度及产胶量高、抗逆性强等优势(陈雄庭等，2002；杨加伟等，2012)而被称为优势种植材料，是具有广阔应用前景的植胶材料(顾晓川等，2018)，在天然橡胶产业发展中占有举足轻重的地位。2、组织培养是繁育体胚植株的唯一途径，其中花药离体培养是橡胶树组织培养的主要技术途径之一(倪燕妹，2010)。橡胶树花药离体培养效果在无性系品种间存在较大差异(谭德冠等，2005；管艳等，2015)，目前仅有少数无性系品种(如‘热研73397’及‘热研72059’)可通过体胚循环增殖技术实现体胚植株规模化繁殖(华玉伟等，2007；hua et al，2010)，大部分无性系品种(如‘热垦628’‘热研879’及‘云研80-1983’)的花药组织培养技术尚未成熟，不能规模化扩繁体胚植株供生产使用。特别是云南垦区自育抗寒高产的三倍体无性系品种(如‘云研77-4’、‘云研77-2’及‘云研73-46’)因体胚发生率极低，目前无法进行规模化繁殖体胚植株，这一技术瓶颈严重制约了云南自育抗寒高产三倍体无性系品种优势种植材料的繁育及推广。为了攻克这一技术难题，已有不少学者对橡胶树三倍体无性系品种的体胚植株繁育技术进行了研究(李玲等，2019；顾晓川等，2022)，但均未获得体胚植株。据此，目前亟需一种橡胶树三倍体无性系品种的体胚植株繁育技术。技术实现思路1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供体胚植株的培育方法，以至少达到成功培育橡胶树三倍体无性系品种的体胚植株。2、本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：3、一种橡胶树三倍体无性系品种体胚植株的培育方法，包括以下步骤：4、s1：将橡胶树三倍体无性系品种的外植体接种在愈伤组织培养基中，进行第一暗培养，得到愈伤组织；5、s2：将所述愈伤组织转接至体胚分化培养基中，进行第二暗培养，得到成熟体胚；6、s3：将所述成熟体胚转入植株再生培养基中继续培养，得到橡胶树三倍体无性系品种体胚植株；7、其中，步骤s1中，所述愈伤组织培养基由ms培养基添加蔗糖、琼脂、椰汁和外源激素2,4-d(2,4-二氯苯氧乙酸)、naa(1-萘乙酸)以及tdz(噻苯隆)制备得到；8、步骤s2中，所述体胚分化培养基由ms培养基添加蔗糖、琼脂、椰汁和外源激素6-ba9、(6-苄氨基嘌呤)、aba(脱落酸)、naa以及kt(植物激动素)制备得到。10、进一步的，步骤s1中，所述橡胶树三倍体无性系品种为云研73-46。11、进一步的，步骤s1中，所述橡胶树三倍体无性系品种的外植体为云研73-46的未成熟雄花。12、进一步的，步骤s1中，所述愈伤组织培养基的制备方法为：在ms培养基中，额外添加70g/l的蔗糖、5.8g/l的琼脂、50ml/l的椰汁、1.0mg/l的2,4-d、0.8mg/l的naa以及0.02mg/l的tdz，调节培养基ph为至5.9±0.1，高温灭菌。13、进一步的，步骤s1中，所述第一暗培养为：在暗环境中，25.5-26.5℃的温度条件下，培养50-60d。14、进一步的，步骤s2中，所述体胚分化培养基的制备方法为：在ms培养基中，额外添加70g/l的蔗糖、5.8g/l的琼脂、50ml/l的椰汁、0.4mg/l的6-ba、0.2mg/l的aba、0.2mg/l的naa以及0.2mg/l的kt，调节培养基ph为至5.9±0.1，高温灭菌。15、进一步的，步骤s2中，所述第二暗培养为：在暗环境中，23.5-24.5℃的温度条件下，培育45-55d。16、进一步的，步骤s3中，所述植株再生培养基包括：80％的ms培养基、2.0mg/l的ga3(赤霉素)、0.4mg/l的vb2(维生素b2)、0.15mg/l的iaa(生长素)、0.5mg/l的kt(植物激动素)、50g/l的蔗糖以及5.8g/l的琼脂。17、进一步的，步骤s3中，所述继续培养为：在光照强度为1000～1500lx、光照时间8h/d的光照条件以及25.5-26.5℃的温度条件下，培育35-45d。18、本发明的有益效果是：19、本发明的培育方法能成功培育橡胶树优良三倍体无性系品种的体胚植株，在愈伤组织诱导阶段，愈伤组织诱导率达91.50％，在体胚诱导阶段，体胚发生率达19.31％。技术特征：1.一种橡胶树三倍体无性系品种体胚植株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于：步骤s1中，所述橡胶树三倍体无性系品种为云研73-46。3.根据权利要求2所述的培育方法，其特征在于：步骤s1中，所述橡胶树三倍体无性系品种的外植体为云研73-46的未成熟雄花。4.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤s1中，所述愈伤组织培养基的制备方法为：在ms培养基中，额外添加70g/l的蔗糖、5.8g/l的琼脂、50ml/l的椰汁、1.0mg/l的2,4-d、0.8mg/l的naa以及0.02mg/l的tdz。5.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤s1中，所述第一暗培养为：在暗环境中，25.5-26.5℃的温度条件下，培养50-60天。6.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤s2中，所述体胚分化培养基的制备方法为：在ms培养基中，额外添加70g/l的蔗糖、5.8g/l的琼脂、50ml/l的椰汁、0.4mg/l的6-ba、0.2mg/l的aba、0.2mg/l的naa以及0.2mg/l的kt。7.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤s2中，所述第二暗培养为：在暗环境中，23.5-24.5℃的温度条件下，培育45-55天。8.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤s3中，所述植株再生培养基包括：80％的ms培养基、2.0mg/l的ga3、0.4mg/l的vb2、0.15mg/l的iaa、0.5mg/l的kt、50g/l的蔗糖以及5.8g/l的琼脂。9.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于：步骤s3中，所述继续培养为：在光照强度为1000～1500lx、光照时间8h/d的光照条件以及25.5-26.5℃的温度条件下，培育35-45天。技术总结本发明公开了一种橡胶树三倍体无性系品种体胚植株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将橡胶树三倍体无性系品种的外植体接种在愈伤组织培养基中，进行第一暗培养，得到愈伤组织；S2：将所述愈伤组织转接至体胚分化培养基中，进行第二暗培养，得到成熟体细胞胚；S3：将所述成熟细胞胚转入植株再生培养基中继续培养，得到橡胶树三倍体无性系品种体胚植株；其中，步骤S1中，所述愈伤组织培养基由MS培养基添加蔗糖、琼脂、椰汁和外源激素2,4‑D、NAA以及TDZ制备得到；步骤S2中，所述体胚分化培养基由MS培养基添加蔗糖、琼脂、椰汁和外源激素6‑BA、ABA、NAA以及KT制备得到。本发明的培育方法能成功培育橡胶树优良三倍体无性系品种的体胚植株。技术研发人员：桂明春,李玲,唐敏,梁国平,孙小龙,方芳,田海受保护的技术使用者：云南省热带作物科学研究所技术研发日：技术公布日：2024/4/8