一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法。背景技术：1、芍药为毛茛科芍药属多年生草本植物，是我国著名的观赏和药用植物，其根入药，分“赤芍”、“白芍”两种，前者善清热凉血、散瘀止痛、清泄肝火；后者善养血调经、柔肝止痛。芍药的传统繁殖方法是分株法和播种法，但是传统方法具有周期长、效率低、繁殖系数低的缺点，不能很好地保持母本的优良性状，严重影响了芍药的规模化生产。2、植物组织培养是植物快速繁殖的一种最为有效的方法，与传统繁殖方法相比，组织培养既能保持原有品种和优良性状，扩大其繁殖系数，缩短育种周期，又不受季节的影响可以周年运转，大幅度地提高了繁殖的效率，便于进行大规模生产。然而，目前芍药的组织培养过程中外植体在自身分泌的酚类化合物的影响下变成黑褐色的一种现象称为褐化，严重时导致植物死亡。使用防褐化剂能够有效地降低褐化的发生，常用的抗褐化剂有维生素c、聚乙烯吡咯烷酮、agno3等。在芍药组培过程中，添加防褐化剂能不同程度减少褐化的发生，但较为有限，部分抗褐化剂的添加还会使材料畸变，阻碍试验材料生长，严重制约了芍药组织培养的发展。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，该方法通过在愈伤组织继代培养步骤和愈伤组织不定芽分化培养步骤的培养基中均添加褪黑素和3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚方式，通过上述2种物质协同作用，能够大量获得芍药愈伤组织，并且经过继代培养后愈伤组织质量有较大的提高，褐化率与对照相比有较大幅度的降低，胚性愈伤的数量得到提高，芍药愈伤组织褐化率降低到了20％以下，为下一步的丛生芽诱导奠定了较好的基础。同时通过实验验证了2种物质协同作用比单独添加效果好。2、本发明通过以下技术方案实现：3、一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，包括在愈伤组织继代培养步骤中的愈伤组织继代培养基中添加褪黑素和3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚；4、和，在愈伤组织不定芽分化培养步骤中的愈伤组织不定芽分化培养基中添加褪黑素和3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚。5、作为优选地，所述褪黑素质量浓度为0.1-1.0mg/l；6、所述3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚质量浓度为0.2-0.8mg/l。7、作为优选地，所述培养方法包括如下步骤：8、s1、外植体选取即消毒：9、选取4-5月份的无病虫害的芍药鳞芽、幼嫩叶片、叶柄作为外植体，使用自来水冲洗2-5小时，在超净工作台内使用75％的酒精消毒20-30秒，使用质量浓度为0.1％的升汞消毒5-6分钟，无菌水冲洗4-5次，剪成2-3平方厘米的叶柄段或叶片，接种于愈伤组织诱导培养基内，每瓶接种外植体4个左右，培养40天后即可诱导出愈伤组织；10、s2、愈伤组织继代培养：11、将诱导到的愈伤组织接种到继代培养基中，每瓶接种愈伤组织6个，大小2平方厘米左右，培养50天即可获得大量的愈伤组织；12、s3、愈伤组织不定芽分化培养：13、将继代培养的愈伤组织接种到愈伤组织分化培养基中，每瓶接种愈伤组织6个，大小2平方厘米左右，培养50天即可获得胚状体愈伤组织；14、s4、将上述获得的胚状体愈伤组织进行室内培养，完成。15、作为优选地，所述s1中，愈伤组织诱导培养基配方为：16、1/2ms培养基+泛酸钙0.1-1.5mg/l+腺嘌呤0.1-1.5mg/l+l-半胱氨酸0.1-1.5mg/l+生物素0.05-0.2mg/l+2,4-二氯苯氧乙酸0.2mg/l+噻苯隆0.4mg/l+蔗糖22-30g/l+植物凝胶1.5-2.5g/l。17、作为优选地，所述s2中，愈伤组织继代培养基配方为：18、1/2ms培养基+泛酸钙0.1-1.5mg/l+腺嘌呤0.1-1.5mg/l+l-半胱氨酸0.1-1.5mg/l+生物素0.05-0.2mg/l+褪黑素0.1-1.0mg/l+3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚0.2-0.8mg/l+naa 0.1mg/l+噻苯隆0.2-0.8mg/l+蔗糖22-30g/l+植物凝胶1.5-2.5g/l。19、作为优选地，所述s3中，愈伤组织不定芽分化培养基配方为：20、1/2ms培养基+泛酸钙0.1-1.5mg/l+腺嘌呤0.1-1.5mg/l+l-半胱氨酸0.1-1.5mg/l+生物素0.05-0.2mg/l+褪黑素0.1-1.0mg/l+3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚0.2-0.8mg/l+ga3 0.6-1.5mg/l+naa 0.1-0.3mg/l+蔗糖22-30g/l+植物凝胶1.5-2.5g/l。21、作为优选地，所述s4中，培养温度为20-25℃。22、作为优选地，所述s4中，培养时采用光照1200-2200lux进行。23、与现有技术相比，本发明至少具有如下技术效果：24、本发明提供了一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，该方法通过在愈伤组织继代培养步骤和愈伤组织不定芽分化培养步骤的培养基中均添加褪黑素和3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚方式，通过上述2种物质协同作用，能够大量获得芍药愈伤组织，并且经过继代培养后愈伤组织质量有较大的提高，褐化率与对照相比有较大幅度的降低，胚性愈伤的数量得到提高，芍药愈伤组织褐化率降低到了20％以下，为下一步的丛生芽诱导奠定了较好的基础。同时通过实验验证了2种物质协同作用比单独添加效果好。技术特征：1.一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，包括在愈伤组织继代培养步骤中的愈伤组织继代培养基中添加褪黑素和3-[(9h-嘌呤-6-基氨基)甲基]苯酚；2.根据权利要求1所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述褪黑素质量浓度为0.1-1.0mg/l；3.根据权利要求1所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括如下步骤：4.根据权利要求3所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述s1中，愈伤组织诱导培养基配方为：5.根据权利要求3所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述s2中，愈伤组织继代培养基配方为：6.根据权利要求3所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述s3中，愈伤组织不定芽分化培养基配方为：7.根据权利要求3所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述s4中，培养温度为20-25℃。8.根据权利要求7所述的一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，其特征在于，所述s4中，培养时采用光照1200-2200lux进行。技术总结本发明公开了一种改善芍药愈伤组织褐化的培养方法，属于植物组织培养领域。该方法通过在愈伤组织继代培养步骤和愈伤组织不定芽分化培养步骤的培养基中均添加褪黑素和3‑[(9H‑嘌呤‑6‑基氨基)甲基]苯酚方式，通过上述2种物质协同作用，能够大量获得芍药愈伤组织，并且经过继代培养后愈伤组织质量有较大的提高，褐化率与对照相比有较大幅度的降低，胚性愈伤的数量得到提高，芍药愈伤组织褐化率降低到了20％以下，为下一步的丛生芽诱导奠定了较好的基础。同时通过实验验证了2种物质协同作用比单独添加效果好。技术研发人员：邓洁琼,黄位年,李钰,杨晓,叶霄,曾静,尹存平,李姝受保护的技术使用者：四川省农业科学院经济作物研究所技术研发日：技术公布日：2024/4/8