一种无血清的NK细胞冻存液及其制备方法和应用与

本发明属于细胞冻存，具体涉及一种无血清的nk细胞冻存液及其制备方法和应用。背景技术：1、nk细胞(自然杀伤细胞)是免疫系统的重要成分，能够识别并攻击体内的异常细胞，如肿瘤细胞和病毒感染细胞，且不会引发移植物抗宿主病(gvhd)。由于nk细胞的这些独特功能，它们在癌症免疫治疗和抗病毒治疗等领域具有巨大的应用潜力。然而，nk细胞对于冻存复苏比t细胞更为敏感，使用简单高效且符合临床要求的冻存液使其在冻存复苏后保持高活性和杀伤效应一直是nk细胞临床应用的主要障碍之一。2、目前细胞冻存过程中普遍使用胎牛血清(fbs)，然而存在以下缺陷：胎牛血清的引入会增加动物源成分，可能含有疯牛病病毒、内毒素、外毒素以及其他未知病毒的风险，进而增加动物病原污染和病毒感染的风险。因此，不能用于临床回输。3、cs10是一种无血清、无动物成分的冻存液，cs10的二甲基亚砜(dmso)含量为10％。该冻存液已广泛应用于免疫细胞冻存，且有较好的冻存保护效果。4、因此，亟需研发无动物源性成分、成分安全，同时复苏后细胞存活率高、细胞活性高的nk细胞的冻存液。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一种无血清的nk细胞冻存液及其制备方法和应用。2、本发明提供了一种nk细胞冻存液，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为(2-15)％的人血清白蛋白以及终浓度为(50-200)iu/ml的il-2，其余为cs10；其中cs10是一种无血清、无动物成分的冻存液，cs10中二甲基亚砜含量为10％。3、进一步地，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为(3-6)％的人血清白蛋白以及终浓度为(80-150)iu/ml的il-2，其余为cs10。4、进一步地，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为5％的人血清白蛋白以及终浓度为100iu/ml的il-2，其余为cs10。5、进一步地，所述cs10为stemcell公司，货号100-1061。6、本发明还提供了一种上述的nk细胞冻存液的制备方法，所述制备方法为：取人血清白蛋白和il-2加入cs10中，混匀即得。7、本发明还提供了一种上述的nk细胞冻存液在nk细胞冻存中的应用。8、进一步地，所述应用的具体步骤包括：将nk细胞和上述的nk细胞冻存液混合后，降温，冻存。9、进一步地，所述冻存液中nk细胞的密度为(5×107)-(10×107)个/ml。10、进一步地，所述冻存液中nk细胞的密度为8×107个/ml。11、综上所述，本发明提供了一种无血清的nk细胞冻存液及其制备方法和应用。本发明通过对nk细胞冻存液中各成分的种类及含量进行筛选，制备得到的nk细胞冻存液能够有效的保护细胞免受损伤，并且在冻存和复苏过程中维持细胞的高活性及回收率、高纯度和高杀伤效应。其中实施例1复苏活率、回收率、nk细胞纯度、杀伤效率均优于对照组和其他实施例，并且具有更低的dmso含量、更高的冻存密度以及更低的il-2用量。本发明nk细胞冻存液成本更低，组分简单，均为临床使用产品及gmp级别，不引入动物源成分及病原体，更安全，更有利于临床使用和推广。12、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。13、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。技术特征：1.一种nk细胞冻存液，其特征在于，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为(2-15)％的人血清白蛋白以及终浓度为(50-200)iu/ml的il-2，其余为cs10；其中cs10是一种无血清、无动物成分的冻存液，cs10中二甲基亚砜含量为10％。2.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为(3-6)％的人血清白蛋白以及终浓度为(80-150)iu/ml的il-2，其余为cs10。3.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述nk细胞冻存液包括以下组分；终浓度为5％的人血清白蛋白以及终浓度为100iu/ml的il-2，其余为cs10。4.根据权利要求1-3任一项所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述cs10为stemcell公司，货号100-1061。5.根据权利要求1-4中任一项所述的nk细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：取人血清白蛋白和il-2加入cs10中，混匀即得。6.根据权利要求1-4中任一项所述的nk细胞冻存液在nk细胞冻存中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用的具体步骤包括：将nk细胞和权利要求1-4中任一项所述的nk细胞冻存液混合后，降温，冻存。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述冻存液中nk细胞的密度为(5-10)×107个/ml。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述冻存液中nk细胞的密度为8×107个/ml。技术总结本发明提供了一种无血清的NK细胞冻存液及其制备方法和应用，属于细胞冻存技术领域。本发明提供的NK细胞冻存液包括以下组分；终浓度为(2‑15)％的人血清白蛋白以及终浓度为(50‑200)IU/mL的IL‑2，其余为CS10；其中CS10是一种无血清、无动物成分的冻存液，CS10中二甲基亚砜含量为10％。复苏活率、回收率、NK细胞纯度、杀伤效率等方面均优于对照组和其他实施例，并且具有更低的DMSO含量、更高的冻存密度以及更低的IL‑2用量。本发明NK细胞冻存液成本更低，组分简单，不引入动物源成分及病原体，更安全，更有利于临床使用和推广。技术研发人员：连通,余鼎,梁洪,刘东,姜琳受保护的技术使用者：成都蓉生药业有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/4/8