一种高浓度间充质干细胞冻存液及其制剂和应用

本发明具体涉及一种高浓度间充质干细胞冻存液及其制剂和应用。背景技术：1、人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells，msc)主要从脐带分离获得，取材简单，来源广泛，基本不受伦理学的限制，具有免疫原性低、免疫调节能力强、更易体外扩增等特点，逐渐成为组织工程和再生医学中最具发展前景的种子细胞。2、msc在临床上已有广泛应用，目前国内干细胞制剂的浓度一般低于107个细胞/ml，制剂规格大于10ml，在临床研究过程中，治疗相关疾病的制剂浓度都比较低，对高浓度冻存干细胞产品鲜有报道。但考虑到临床阶段的给药量、给药周期和某些适应症的特殊性，需要大量给药和局部给药治疗，并且对使用体积的限制要求，所以对于高浓度冻存干细胞制剂的需求更加迫切。技术实现思路1、本发明解决的技术问题是提高高浓度冻存干细胞的细胞活率并且使其维持高生物学性能，尤其是间充质干细胞。2、为了解决上述问题，本发明提供了下述应用。3、全能核酸酶在下述任一中的应用：4、a1)提高高浓度冻存干细胞活率和/或制备提高高浓度冻存干细胞活率产品中的应用；5、a2)制备提高高浓度干细胞活率的细胞冻存液中的应用；6、a3)提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力产品中的应用；7、a4)制备提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力的细胞冻存液中的应用；8、a5)提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力产品中的应用；9、a6)制备提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力的细胞冻存液中的应用；10、a7)提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力产品中的应用；11、a8)制备提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力的细胞冻存液中的应用。12、为了解决上述问题，本发明还提供了上述提高高浓度冻存干细胞活率产品的制备方法。13、所述方法包括将全能核酸酶作为有效成分的步骤。14、上文中，所述物质可为试剂、试剂盒或组合物。15、上文中，所述物质含有所述全能核酸酶。16、为了解决上述问题，本发明还提供了上述提高高浓度冻存干细胞活率产品。17、所述产品包括全能核酸酶，还包下述任一种：18、k1)无；19、k2)人血白蛋白、二甲基亚砜(dmso)和复方电解质中的至少一种。20、如上所述的产品中，所述全能核酸酶、所述人血白蛋白、所述二甲基亚砜和所述复方电解质的配比为25ku：50g：55g：10.241g。21、上文中，所述复方电解质由氯化钠、葡萄糖酸钠、三水合醋酸钠、氯化钾和六水合氯化镁组成，所述氯化钠、葡萄糖酸钠、三水合醋酸钠、氯化钾和六水合氯化镁的配比为5.26g：5.02g：3.68g：0.37g：0.30g。22、为了解决上述问题，本发明还提供了细胞冻存液。23、所述细胞冻存液含有上述的产品和溶剂。24、为了解决上述问题，本发明还提供了如上所述的细胞冻存液。25、所述全能核酸酶的含量为25ku/l。26、上文中，所述溶剂可为水。27、上文中，所述水可为注射用水。28、上文中，所述细胞冻存液可由以下成分组成：5％的dmso、70％的复方电解质注射液、25％的人血白蛋白(人血白蛋白的质量体积比为20％)和1×10-2％的全能核酸酶，所述百分含量为体积百分含量。29、所述人血白蛋白(hsa)可购自购自瑞士杰特贝林生物制品有限公司，货号为s20170005。在该产品中，人血白蛋白的质量体积比为20％。30、上文中，所述全能核酸酶可购自近岸公司，货号为gmp-1707。在该产品中，全能核酸酶浓度为250ku/ml。31、上文中，所述复方电解质注射液可购自上海百特医疗用品有限公司，货号为国药准字h20000475。在该产品中，复方电解质注射液含有：氯化钠5.26g/l；葡萄糖酸钠5.02g/l；醋酸钠(c2h3nao2·3h2o)3.68g/l；氯化钾0.37g/l；氯化镁(mgcl2·6h2o)0.30g/l。32、上文中，所述二甲基亚砜(dmso)可购自湖南九典制药有限公司，货号为f2020999079。在该产品中，二甲基亚砜的纯度为分析纯。33、本技术中，所述高浓度冻存干细胞中的干细胞密度可为1×107至5×107个细胞/ml。34、本技术中，所述高浓度冻存干细胞中的干细胞密度可为3×107个细胞/ml。35、上文中，所述干细胞在细胞冻存液中的细胞密度为1×107至5×107个细胞/ml。36、上文中，所述干细胞在细胞冻存液中的细胞密度为3×107个细胞/ml。37、上文中，所述干细胞可为间充质干细胞。38、为了解决上述问题，本发明还提供了下述应用。39、上述产品在下述任一中的应用：40、a1)提高高浓度冻存干细胞活率和/或制备提高高浓度冻存干细胞活率产品中的应用；41、a2)制备提高高浓度干细胞活率的细胞冻存液中的应用；42、a3)提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力产品中的应用；43、a4)制备提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力的细胞冻存液中的应用。44、a5)提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力产品中的应用；45、a6)制备提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力的细胞冻存液中的应用；46、a7)提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力产品中的应用；47、a8)制备提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力的细胞冻存液中的应用。48、上述的细胞冻存液在下述任一中的应用：49、b1)提高高浓度冻存干细胞活率和/或制备高浓度提高冻存干细胞活率产品中的应用；50、b2)提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制总淋巴细胞增殖能力产品中的应用；51、b3)提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞抑制炎性因子tnf-α分泌能力产品中的应用；52、b4)提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力和/或制备提高高浓度冻存干细胞促进生长因子tgf-β分泌能力产品中的应用。53、上文中，所述高浓度干细胞的细胞密度可为1×107至5×107个细胞/ml。54、上文中，所述高浓度干细胞的细胞密度可为3×107个细胞/ml。55、为了解决上述问题，本发明还提供了冻存间充质干细胞的制备方法。56、所述方法包括对间充质干细胞使用上述的细胞冻存液进行冻存。57、上文中，使用上述的细胞冻存液进行冻存时，间充质干细胞的密度可为1×107至5×107个细胞/ml。间充质干细胞的密度可为3×107个细胞/ml。58、上文中，所述干细胞可为间充质干细胞。所述间充质干细胞可为脐带间充质干细胞，羊膜间充质干细胞，脂肪间充质干细胞，骨髓间充质干细胞和由多能干细胞分化获得的间充质干细胞中的一种或多种。59、上文中，所述间充质干细胞在细胞冻存液中的细胞密度为1×107至5×107个细胞/ml。60、上文中，所述间充质干细胞在细胞冻存液中的细胞密度为3×107个细胞/ml。61、为了解决上述问题，本发明还提供了间充质干细胞。62、所述间充质干细胞为将使用上述方法制备的冻存间充质干细胞进行解冻获得。63、上述的方法或上述的间充质干细胞中，所述间充质干细胞的细胞密度为1×107至5×107个细胞/ml。64、上文中，所述间充质干细胞在细胞冻存液中的细胞密度为3×107个细胞/ml。65、有益效果66、本发明公开了一种高浓度间充质干细胞冻存液及其制剂和应用。解决的技术问题是提高干细胞的冻存密度，并且可以维持干细胞的活率和生物学性能在很高的水平。具体公开了细胞冻存液，所述细胞冻存液包括全能核酸酶、人血白蛋白、二甲基亚砜和复方电解质注射液；所述全能核酸酶、人血白蛋白(人血白蛋白的质量体积比为20％)、二甲基亚砜和复方电解质的配比为25ku/l：25vol％：5vol％：70vol％，所述百分含量为体积百分含量。67、本发明的细胞冻存液与常规细胞冻存液[冻存液1：75％复方电解质注射液，5％二甲基亚砜，5％右旋糖酐40氯化钠注射液，15％人血白蛋白(人血白蛋白的质量体积比为20％)，所述百分含量为体积百分含量；冻存液2：70％复方电解质注射液，5％二甲基亚砜，25％人血白蛋白(人血白蛋白的质量体积比为20％)，所述百分含量为体积百分含量]相比，用本发明的冻存液冻存高浓度干细胞可明显提高冻存细胞活率，在生物学性能方面，此冻存液冻存的间充质干细胞在抑制总淋巴细胞增殖能力、抑制炎性因子tnf-α分泌能力和促进生长因子tgf-β分泌能力均具有良好效果。68、上述全能核酸酶购自近岸公司，货号为gmp-1707(在该产品中，全能核酸酶浓度为250ku/ml)。上述二甲基亚砜购自湖南九典制药有限公司，货号为f2020999079(在该产品中，二甲基亚砜的纯度为分析纯)。上述人血白蛋白瑞士杰特贝林生物制品有限公司，货号为s20170005(在该产品中，人血白蛋白的质量体积比为20％)。上述复方电解质注射液购自上海百特医疗用品有限公司，货号为国药准字h20000475(在该产品中，复方电解质注射液含有：氯化钠5.26g/l；葡萄糖酸钠5.02g/l；醋酸钠(c2h3nao2·3h2o)3.68g/l；氯化钾0.37g/l；氯化镁(mgcl2·6h2o)0.30g/l)。69、本公司研究发明一种人脐带间充质干细胞的高浓度冻存制剂，冻存细胞活率高，生物学性能表现优异，满足大量给药使用要求，可作为干细胞产品供临床使用。