间充质干细胞冻存液及其冻存方法与流程

本申请涉及干细胞，具体而言，涉及一种间充质干细胞冻存液及其冻存方法。背景技术：1、干细胞（stem cell）是形成各组织、器官的原始细胞，能够自我更新并在一定条件下分化成其他细胞的未分化细胞。干细胞是疾病机制和药理研究的热点，在细胞治疗和再生医学上具有广阔的应用前景。干细胞移植治疗通过利用干细胞的自我更新、免疫调节、抗炎、信号传导和分化特性，达到修复或替换受损细胞或组织，从而达到治疗目的，为各个系统的疑难杂症的治疗带来了希望。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，msc）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。msc具有干细胞的共性，即自我更新、多向分化和归巢的能力。在特定的机体外分化环境下，msc能够分化为神经、心脏、骨、软骨、脂肪、上皮等多种组织细胞，被认为是细胞治疗技术的最有希望的来源细胞之一，msc作为重要的再生医学资源，在临床的疾病治疗领域将有非常重要的应用价值。细胞疗法和再生医学产品拥有非常独特的产业链，在整个产业链上，细胞必须保持活力和功能。然而由于传统的间充质干细胞注射液导致细胞解冻后功能不佳，其临床应用也受到了限制。2、因此，亟需一种能够防止冻存过程中的细胞损伤、保持细胞复苏后的高活率及其功能的冻存液。技术实现思路1、为了克服传统技术中的上述问题，本申请提供了一种间充质干细胞冻存液，其在冷冻保存时获得间充质干细胞的高存活率、且能够防止冻存过程中的细胞损伤和保持细胞复苏后的高活率。为了最大限度地提高存活率，在冷冻保存前将间充质干细胞冻存液添加到间充质干细胞中。具体地，本申请还涉及间充质干细胞冻存液用途，其用于增加经冷冻保存后的间充质干细胞的存活力，以及改善冷冻保存间充质干细胞在低温下的长期稳定性。2、本申请的一方面涉及一种间充质干细胞冻存液，按体积百分比计，所述冻存液的制备原料包括10%~15%血清白蛋白溶液、5%~10%二甲基亚砜及75%~85%右旋糖酐40葡萄糖注射液；所述血清白蛋白溶液中血清白蛋白的浓度为0.1g/ml~0.3g/ml，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中右旋糖酐40的浓度为25g/ml~35g/ml，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的浓度为20g/ml~30g/ml；所述二甲基亚砜和所述右旋糖酐40葡萄糖注射液的体积比为1：（7.5~15）。3、在其中一个实施例中，按体积百分比计，所述冻存液的制备原料包括10%~12%血清白蛋白溶液、8%~10%二甲基亚砜及75%~80%右旋糖酐40葡萄糖注射液。4、在其中一个实施例中，所述二甲基亚砜和所述右旋糖酐40葡萄糖注射液的体积比为1：（7.5~10）。5、本申请另一方面提供了一种间充质干细胞的冻存方法，其特在于，包括以下步骤：6、将待冻存的间充质干细胞与如上述的间充质干细胞冻存液进行混合后再冷冻。7、在其中一个实施例中，所述间充质干细胞的密度为6×106个/ml~7×106个/ml。8、在其中一个实施例中，所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。9、在其中一个实施例中，所述混合的步骤包括：10、向所述间充质干细胞中加入预冷的血清白蛋白溶液和部分右旋糖酐40葡萄糖注射液进行重悬，得到中间混合物；11、向所述中间混合物中加入预冷的二甲基亚砜和剩余的右旋糖酐40葡萄糖注射液，进行混合。12、在其中一个实施例中，所述预冷满足（1）~（2）中至少一个条件：13、（1）所述预冷处理的温度为2℃~8℃；14、（2）所述预冷处理的时间为30min以上。15、在其中一个实施例中，所述冷冻的方法包括：16、先于0℃~4℃下，进行预冷处理；17、进行第一次降温处理，以0.5℃/min~2℃/min的速度降温至-40℃；18、进行第二次降温处理，以4℃/min~6℃/min的速度降温至-90℃。19、在其中一个实施例中，所述冷冻的方法包括：20、先于4℃下，进行预冷处理；21、进行第一次降温处理，以1℃/min的速度降温至-40℃；22、进行第二次降温处理，以5℃/min的速度降温至-90℃。23、与传统技术相比，本申请的有益效果为：24、二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂，能够快速穿透细胞膜进入细胞中，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。二甲基亚砜与右旋糖酐40葡萄糖注射液联合应用，能够发挥渗透性和非渗透性两种冻存保护剂的协同作用，并配以对细胞膜具有稳定作用的血清白蛋白，形成了一个比较稳定的冷冻保护体系。上述成分互相配合，使得间充质干细胞冻存液在冷冻保存时获得间充质干细胞的高存活率、且能够防止冻存过程中的细胞损伤和保持细胞复苏后的高活率，利于间充质干细胞体外大规模培养和临床应用。技术特征：1.一种间充质干细胞冻存液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存液的制备原料包括10%~15%血清白蛋白溶液、5%~10%二甲基亚砜及75%~85%右旋糖酐40葡萄糖注射液；所述血清白蛋白溶液中血清白蛋白的浓度为0.1g/ml~0.3g/ml，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中右旋糖酐40的浓度为25 g/ml ~35 g/ml，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的浓度为20 g/ml ~30 g/ml；所述二甲基亚砜和所述右旋糖酐40葡萄糖注射液的体积比为1：（7.5~15）。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存液的制备原料包括10%~12%血清白蛋白溶液、8%~10%二甲基亚砜及75%~80%右旋糖酐40葡萄糖注射液。3.根据权利要求1或2所述的间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述二甲基亚砜和所述右旋糖酐40葡萄糖注射液的体积比为1：（7.5~10）。4.一种间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：5.根据权利要求4所述的间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，所述间充质干细胞的密度为6×106个/ml~7×106个/ml。6.根据权利要求5所述的间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。7.根据权利要求4~6任一项所述的间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，所述混合的步骤包括：8.根据权利要求7所述的冻存方法，其特征在于，所述预冷满足（1）~（2）中至少一个条件：9.根据权利要求4~6任一项所述的间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，所述冷冻的方法包括：10.根据权利要求9所述的间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，所述冷冻的方法包括：技术总结本申请涉及一种间充质干细胞冻存液及其冻存方法。按体积百分比计，该冻存液的制备原料包括10%~15%血清白蛋白溶液、5%~10%二甲基亚砜及75%~85%右旋糖酐40葡萄糖注射液；所述血清白蛋白溶液中血清白蛋白的浓度为0.1g/mL~0.3g/mL，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中右旋糖酐40的浓度为25 g/mL~35 g/mL，所述右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的浓度为20 g/mL~30 g/mL；所述二甲基亚砜和所述右旋糖酐40葡萄糖注射液的体积比为1：（7.5~15）。技术研发人员：梅花,程腊梅,王斯琪,李闯,朱钩,刘艳慧,高晴,常亮,陈佳,林戈,卢光琇受保护的技术使用者：湖南光琇高新生命科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/4/7