一种芒果种质资源创制和新品种选育的方法

本发明涉及农作物育种，尤其是一种芒果种质资源创制和新品种选育的方法。背景技术：1、芒果是著名的热带水果，但芒果的选育种周期漫长，通常需要10-20年才能够选育出一个优秀的新品种。目前芒果的育种方式主要分为杂交育种和实生选种。其中杂交育种效率很低，介于0.1％-2％之间。实生选种是目前最为广泛运用的方法，但实生选种缺少亲本来源信息，其品质以偏差的为主，难以获得优良单株。2、因此，寻找一种可以大量创制优良主栽芒果品种的自然杂交后代，获得具有不同性状的芒果种质资源，显著缩短芒果的育种周期的。技术实现思路1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种芒果种质资源创制和新品种选育的方法，具体是通过以下技术方案得以实现的：2、一种芒果种质资源创制的方法，以主栽芒果品种为亲本，将两个芒果亲本与外界隔离，芒果自然授粉；自然管理到收获芒果，记录好果实的父母本信息，播种栽培实生苗，通过scot分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，将亲缘关系<0.9的单株，定义为实生变异单株进行栽培；待枝条老熟后，将其嫁接到成年芒果树上，促进其开花，观察果实性状并检测果实品质，获得大量具有不同性状的芒果种质资源。3、进一步的，所述芒果亲本中，母本为单胚品种。4、进一步的，所述通过scot分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，是使用scot分子标记技术对实生后代进行pcr检测。5、进一步的，所述使用scot分子标记技术对实生后代进行pcr检测，检测体系为25μl：1μl模板dna；12.5μl 2×santaqpcrmix；10μmol·l-1浓度的引物1μl；灭菌水10.5μl。pcr扩增程序为：95℃变性3min，95℃40s，50℃50s，72℃2min进行36个循环，最后在72℃延伸10min。在pcr产物中加入5μl 6×loadbuffer(包含gelred荧光染料)，震荡混匀后，加样8μlpcr产物到1.8％的琼脂糖凝胶中进行电泳，电泳缓冲液为1×tae，160v电压电泳约20min，用凝胶成像系统观察拍照。观察各条引物的电泳谱带，有带记作1，无带记为0。条带统计时，仅统计清晰稳定出现的条带，若隐若现的条带不予统计。用ntsyspc2.1软件的dice方法计算相似系数，用upgma法进行聚类分析，构建系统树，利用principal coordinateanalysis(pcoa；gower,1966)法进行主成份分析。6、进一步的，所述scot分子标记引物，其使用的引物序列具体如下：7、8、9、所述的芒果种质资源创制方法，具体包括以下步骤：10、(1)芒果亲本选择原则：选择主栽具有优良性状的芒果品种为亲本，其中母本必须选择单胚品种，父本不限制胚性；推荐以金煌、台农1号和贵妃为母本或父本，桂七只能够做父本；11、(2)芒果自然杂交与实生后代栽培：将筛选的两个芒果杂交亲本同时嫁接在同一颗芒果树上，两个亲本互为父母本，枝条交错嫁接，在开花前期，用防虫网(80目)将这株芒果树与外界隔离，当花盛开的时候，在网内释放苍蝇作为授粉昆虫进行自然授粉，谢花后，撤出防虫网，常规管理芒果树直到果实成熟。采收上述芒果果实，并做好果实亲本信息登记，剥开种子，栽培实生苗；12、(3)芒果实生变异后代筛选：待上述实生苗长出3-4片叶子时，使用常规ctab法提取基因组dna，分别利用琼脂糖电泳和分光光度计检测dna的完整性和浓度，并将dna稀释到50ng·μl-1；使用scot分子标记技术对实生后代进行pcr检测，检测体系为25μl：1μl模板dna；12.5μl 2×santaqpcrmix；1μl引物；灭菌水10.5μl。pcr扩增程序为：95℃变性3min，95℃40s，50℃50s，72℃2min进行36个循环，最后在72℃延伸10min。在pcr产物中加入5μl 6×loadbuffer(包含gelred荧光染料)，震荡混匀后，加样8μlpcr产物到1.8％的琼脂糖凝胶中进行电泳，电泳缓冲液为1×tae，160v电压电泳约20min，用凝胶成像系统观察拍照。观察各条引物的电泳谱带，有带记作1，无带记为0；条带统计时，仅统计清晰稳定出现的条带，若隐若现的条带不予统计；用ntsyspc2.1软件的dice方法计算相似系数，用upgma法进行聚类分析，构建系统树，利用principal coordinate analysis(pcoa；gower,1966)法进行主成份分析；对于相似性系数小于0.9的单株定义为实生变异后代，只保留实生变异单株继续进行栽培；13、(4)促进实生变异后代提早开花：对于上述鉴定获得的实生变异单株在第二年的4月份嫁接到成年芒果树上，对新稍进行精心管理，促进其在第二年开花结果；14、(5)芒果种质资源的创制和优良单株的筛选：对于上述获得的芒果资源进行果实性状评价，即可获得大量具有不同果实性状的芒果种质资源。15、进一步的，所述1μl引物，其浓度为10μmol·l-1。16、一种芒果新品种选育的方法，采用上述得到的不同性状的芒果种质资源，选择其中果实外观漂亮、大小适宜且品质优秀的单株进行嫁接，并对其丰产性能、品质进行评价，得到优良的新品种。17、与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：18、本申请以主栽芒果品种为亲本，通过用防虫网将两个芒果亲本与外界隔离，通过释放苍蝇，促进芒果自然授粉。自然管理到收获芒果，记录好果实的父母本信息，播种栽培实生苗，通过scot分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，将亲缘关系<0.9的单株，定义为实生变异单株进行栽培，待枝条老熟后，将其嫁接到成年芒果树上，促进其开花，观察果实性状并检测果实品质，从而获得大量具有不同性状的芒果种质资源，对于其中品质表现优异的单株进一步进行选育，获得芒果优良新品种。本申请中自然杂交育种与变异单株选择需1年时间，嫁接到开花一般需要2年，只需要3年时间就可以创制出优良主栽芒果品种的大量实生变异后代种质资源，筛选获得优良单株，进一步对优良单株进行大量嫁接，对其丰产性、稳定性等进行进一步评价，对于依然表现优秀的单株可申请新品种权，通常需要2年，总体育种周期缩短至5年。本申请可以将芒果选育种的年限压缩到5年。并且本方法获得的变异后代可以知道亲本的来源，也可以提高优良单株的获得率。技术特征：1.一种芒果种质资源创制的方法，其特征在于，以主栽芒果品种为亲本，将两个芒果亲本与外界隔离，芒果自然授粉；自然管理到收获芒果，记录好果实的父母本信息，播种栽培实生苗，通过scot分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，将亲缘关系<0.9的单株，定义为实生变异单株进行栽培；待枝条老熟后，将其嫁接到成年芒果树上，促进其开花，观察果实性状并检测果实品质，获得大量具有不同性状的芒果种质资源。2.根据权利要求1所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，所述芒果亲本中，母本为单胚品种。3.根据权利要求1所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，所述通过scot分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，是使用scot分子标记技术对实生后代进行pcr检测。4.根据权利要求3所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，所述使用scot分子标记技术对实生后代进行pcr检测，检测体系为25μl：1μl模板dna，dna浓度为50ng；12.5μl 2×santaqpcrmix；10μmol·l-1浓度的引物1μl；灭菌水10.5μl；pcr扩增程序为：95℃变性3min，95℃40s，50℃50s，72℃2min进行36个循环，最后在72℃延伸10min；在pcr产物中加入5μl 6×loadbuffer，震荡混匀后，加样8μlpcr产物到1.8％的琼脂糖凝胶中进行电泳，电泳缓冲液为1×tae，160v电压电泳约20min，用凝胶成像系统观察拍照；观察各条引物的电泳谱带，有带记作1，无带记为0；条带统计时，仅统计清晰稳定出现的条带，若隐若现的条带不予统计；用ntsyspc2.1软件的dice方法计算相似系数，用upgma法进行聚类分析，构建系统树，利用principalcoordinateanalysis法进行主成份分析。5.根据权利要求1所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，所述scot分子标记引物，其使用的引物序列具体如下：6.根据权利要求1所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，包括以下步骤：7.根据权利要求6所述的芒果种质资源创制方法，其特征在于，所述1μl引物，其浓度为10μmol·l-1。8.一种芒果新品种选育的方法，其特征在于，将权利要求1中得到的不同性状的芒果种质资源，选择其中果实外观漂亮、大小适宜且品质优秀的单株进行嫁接，并对其丰产性能、品质进行评价，得到优良的新品种。技术总结本发明涉及农作物育种技术领域，尤其涉及一种芒果种质资源创制和新品种选育的方法。本申请以主栽芒果品种为亲本，通过用防虫网将两个芒果亲本与外界隔离，通过释放苍蝇，促进芒果自然授粉。自然管理到收获芒果，记录好果实的父母本信息，播种栽培实生苗，通过SCoT分子标记引物检测实生单株与亲本的遗传多样性，将亲缘关系<0.9的单株，定义为实生变异单株进行栽培，待枝条老熟后，将其嫁接到成年芒果树上，促进其开花，观察果实性状并检测果实品质，从而获得大量具有不同性状的芒果种质资源，对于其中品质表现优异的单株进一步进行选育，获得芒果优良新品种。技术研发人员：罗聪,何新华,黄楚婷,李柏君受保护的技术使用者：广西大学技术研发日：技术公布日：2024/4/7