一种天麻组织培养繁育方法

本发明涉及天麻组织培育，具体涉及一种天麻组织培养繁育方法。背景技术：1、天麻是兰科天麻属多年生寄生草本植物，以干燥块茎入药，是我国常用的名贵中药材，具有息风止痉，平抑肝阳，祛风通络的功效，用于治疗小儿惊风，癫痫抽搐，破伤风，头痛眩晕，手足不遂，肢体麻木，风湿痹痛等病症。始载于《神农本草经》并列为上品，在我国已有 2000 多年的药用历史，也是深受现代人青睐的保健食材。2、现代对天麻的种植研究已经开始深入基因组学的研究，不同地区不同品种的天麻最终造成天麻中营养成分和有益效果的差异，通过深入基因组学，对天麻转录组测序从而研究验证天麻中中药成分的生物合成路径关键基因是现阶段一大重要的研究方向。3、在上述研究方向下，往往需要选取遗传特征一致、品相接近的同源种麻进行检测，一般检测通常是需要在每年的3月进行试验地栽种，后同年11-12月份采摘后液氮冷冻保存进行后续的实验，整体种植周期长，且在种植过程中不同的天麻受到环境和天气的影响也较大，对实验室操作来说较为繁琐，且也容易影响实验效果。4、组织培养是植物的一种无性繁殖技术，其能够通过植物的一个组织经过诱导繁育成一个完整的个体，对于天麻的转录组测序实验来说，通过组织培养制备天麻测序材料能够有效提升原材料的供应稳定性，减少外界环境的影响，同时缩短整个实验周期，但是目前的天麻组织培养的培养周期大多在60d左右，整体耗时较长，而实验室对天麻测序并不需要将天麻组织培养成一个完整的个体，仅需要繁育出较大的块茎就可以投入实验，所以设计一种快速天麻组织培育的方法能够有效提升实验效率。技术实现思路1、针对现有技术不足，本发明提供一种天麻组织培养繁育方法，有效提升天麻组织繁育的生长效率，减少后续对天麻进行实验研究的实验时间，从而保证整个实验的连续性，加速实验进展，同时减少实验的经费投入。2、为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：3、一种天麻组织培养繁育方法，所述天麻组织培养繁育方法包括以下步骤：4、（1）天麻外植体的获取：将天麻采用清水刷洗除去表面泥沙，后采用冰水反复冲洗，再切割成0.5-1.0cm的小块，获得天麻外植体；5、（2）外植体的灭菌：将上述天麻外植体采用75%的酒精浸泡消毒10s，后再采用浓度为1%的氯化汞浸泡3min，重复酒精浸泡和氯化汞浸泡操作2-3次，再采用45-50℃水浴保温的无菌水冲洗2-3次，后采用常温无菌水继续冲洗1-2次，再吸干水分得灭菌外植体备用；6、（3）培养基的制备：选择ms +玉米素0.5 mg/l+茶乙酸0.1 mg/l+蜜环菌提取液80g/l的培养基，得预备培养基；7、（4）组织培养：将灭菌外植体表面接种活化后的蜜环菌，后将其转接至上述预备培养基中，置于暗室中恒温培养，获得天麻组织培养产物。8、优选的，所述步骤（1）中冰水反复冲洗的次数为3-5次。9、优选的，所述步骤（1）中天麻外植体选择为天麻茎尖或茎身切块。10、优选的，所述步骤（2）中采用无菌纸对外植体进行水分吸附干燥处理。11、优选的，所述蜜环菌提取液的制备方法包括以下步骤：12、s1-1、固体培养基制备：将5g酵母膏、10 g葡萄糖、3g蛋白胨和10 g琼脂加入烧杯中，高压灭菌后冷却倒平板，获得固体培养基；13、s1-2、液体培养基制备：酵母膏10g/l、葡萄糖20g/l、蛋白胨6g/l，余量为水，高压灭菌后备用；14、s1-3、在固体培养基中接种蜜环菌孢子，进行活化培养，至其生长旺盛后接种至液体培养基中进行培养繁殖，待生长旺盛后取液体培养基的液体基质高压灭菌，得蜜环菌提取液。15、优选的，所述步骤s1-3中固体培养基和液体培养基中培养的方式为暗室避光，25℃恒温培养，且待固体培养基中菌丝长满后，切成0.5cm的方块置于100ml的液体培养基中，继续静置培养2-3d。16、优选的，所述步骤（4）中活化的蜜环菌获取方式包括以下步骤：17、s2-1、固体培养基制备：将5g酵母膏、10 g葡萄糖、3g蛋白胨和10 g琼脂加入烧杯中，高压灭菌后冷却倒平板，获得固体培养基；18、s2-2、液体摇瓶培养基制备：马铃薯200g/l、葡萄糖20g/l、磷酸二氢钾3g/l、七水硫酸镁1.5g/l、vb110mg/l，其余为水；19、s2-3、在固体培养基中接种蜜环菌孢子，进行活化培养，至其生长旺盛后接种至液体摇瓶培养基中进行培养繁殖，获得活化的蜜环菌。20、优选的，所述步骤s2-3中待固体培养基中菌丝长满后，切成0.5cm的方块置于100ml的液体摇瓶培养基中。21、优选的，所述步骤s2-3中在固体培养基和活化培养和液体摇瓶培养基中培养的方式为避光25±2℃恒温培养，且液体摇瓶培养基中培养还需以120r/min的速度进行摇瓶处理。22、优选的，所述步骤（4）中培养的温度为20±2℃。23、本发明提供一种天麻组织培养繁育方法，与现有技术相比优点在于：24、（1）本发明在取天麻外植体时采用冰水冲洗，同时通过后续的温水冲洗来刺激天麻组织，提升组织后续较高的分化活性，提升组织培养的效率，并且通过酒精与氯化汞循环处理能够有效保证杀菌效果的同时提升天麻外植体后续组织培养的成活率，防止天麻组织培养的褐化死亡。25、（2）本发明通过在组织培养的培养基中添加蜜环菌提取液，并对外植体接种活化后的蜜环菌，能够有效保证蜜环菌促进天麻组织的分化生长，同时防止蜜环菌过分生长造成天麻外植体死亡，提升整个天麻组织培养的效率，使得天麻外植体快速培养生长成可供实验室检测用的大小茎块，缩短实验周期，提升实验室检测便捷性。技术特征：1.一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于，所述天麻组织培养繁育方法包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤（1）中冰水反复冲洗的次数为3-5次。3.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤（1）中天麻外植体选择为天麻茎尖或茎身切块。4.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤（2）中采用无菌纸对外植体进行水分吸附干燥处理。5.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述蜜环菌提取液的制备方法包括以下步骤：6.根据权利要求5所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤s1-3中固体培养基和液体培养基中培养的方式为暗室避光，25℃恒温培养，且待固体培养基中菌丝长满后，切成0.5cm的方块置于100ml的液体培养基中，继续静置培养2-3d。7.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于，所述步骤（4）中活化的蜜环菌获取方式包括以下步骤：8.根据权利要求7所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤s2-3中待固体培养基中菌丝长满后，切成0.5cm的方块置于100ml的液体摇瓶培养基中。9.根据权利要求7所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤s2-3中在固体培养基和活化培养和液体摇瓶培养基中培养的方式为避光25±2℃恒温培养，且液体摇瓶培养基中培养还需以120r/min的速度进行摇瓶处理。10.根据权利要求1所述的一种天麻组织培养繁育方法，其特征在于：所述步骤（4）中培养的温度为20±2℃。技术总结本发明提供一种天麻组织培养繁育方法，涉及天麻组织培育技术领域。所述天麻组织培养繁育方法主要包括天麻外植体的获取、外植体的循环灭菌、培养基蜜环菌提取液的添加、培养时活化蜜环菌的接种等步骤。本发明克服了现有技术的不足，有效提升天麻组织繁育的生长效率，减少后续对天麻进行实验研究的实验时间，从而保证整个实验的连续性，加速实验进展，同时减少实验的经费投入。技术研发人员：兰珊珊,杨芳,魏茂琼,邵金良,刘宏程,林昕,王丽受保护的技术使用者：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所技术研发日：技术公布日：2024/3/31