一种创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法

本发明涉及芦笋组培领域，尤其是涉及一种创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法。背景技术：1、芦笋，学名石刁柏，为百合科天门冬属多年生宿根性草本植物，含有丰富的维生素b、维生素a以及叶酸、硒、铁、锰、锌等微量元素，且具有多种人体所必需的氨基酸。同时，芦笋含硒量高于一般蔬菜，与含硒丰富的蘑菇接近，甚至可与海鱼、海虾等的含硒量媲美。芦笋具有防癌、抗癌等作用，市场前景广阔，在国际上享有“蔬菜之王”的美称，是全球性贸易的蔬菜品种，是高价值蔬菜之一。现有技术中，芦笋的根系发达，适应性广，属于拒盐植物范畴，在ph值为5.5-7.8的土壤中均可栽培，是中国盐碱地开发利用的先锋植物。2、但是，目前芦笋耐盐碱研究主要集中在对现有芦笋种质资源的鉴定筛选、芦笋的生态学特征分析、耐盐碱芦笋的生理生化机理研究、芦笋的盐碱地育苗及芦笋栽培技术等方面的研究，对于耐中重度盐碱芦笋新品种及种质选育方法的研究尚存在诸多空白。3、同时，现有的芦笋种质资源仅能够适应于低度盐碱地种植，仅能够耐受含盐量指标约3‰、ph值为5.5-7.8的土壤环境；针对于盐量指标为4-8‰且ph值为8.0-9.0的中重度盐碱土壤环境，现有的芦笋种质资源无法耐受其过高的盐碱环境，种植过程中芦笋幼苗长势弱，抽生的茎数量少；且随着种植时间的延长，存在有芦笋幼苗失去活性或生长缓慢的问题。4、进一步的，现有常规的育种创制芦笋耐盐碱种质的方法，还存在有育种年限长（一般种年限至少为3年），育种效率低下，创制成本高且创制的芦笋种质的耐盐碱性能不稳定等问题。5、由此，提供一种能够解决前述缺陷的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，具有重要意义。技术实现思路1、为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，能够弥补现有技术对于耐中重度盐碱芦笋新品种选育方法方面的研究不足，克服现有的芦笋种质资源仅能够适应于低度盐碱地种植，无法耐受中重度盐碱土壤环境的问题；以及克服现有创制芦笋耐盐碱种质方法存在的育年限长、育种效率低下、创制成本高；以及创制的芦笋种质的耐盐碱性能不稳定的问题。2、为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：3、一种创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，由以下步骤组成：启动培养、一次增殖培养、二次增殖培养、三次增殖培养、继代增殖培养、生根培养、转接培养。4、所述启动培养的方法为，首先选取确定采用的高产优质芦笋种质，具体是，根据芦笋笋条的外观形态、口感风味、产量、生育指数、病情指数等，选取综合性状好的芦笋为高产优质芦笋种质；选取该高产优质芦笋种质中前一年度未受过病虫害的露地种植芦笋，于当年的4月中旬到5月期间，选择从地里冒出来粗细均匀，直径在1.8-2.2cm范围内，高度为20cm左右，且鳞片包裹紧实的笋条；贴地从笋条基部切取，获得优质新鲜笋条；接种于y-1启动培养基中培养，控制培养温度为24-26℃，光照时间为每天12-14小时，光照强度为2500-3000lx，培养时间为18-21天；经四代继代培养，获得增殖芦笋试管苗。5、所述启动培养中，y-1启动培养基的原料及含量为：ms培养基、6-ba 1.0-1.2mg/l、naa 0.1mg/l、蔗糖45g/l、琼脂粉5g/l；y-1启动培养基的ph值为5.8。6、所述ms培养基为改良ms基础培养基，具体成分及含量为：硝酸钾1900mg/l，硝酸铵1650mg/l，磷酸二氢钾170mg/l，硫酸镁370mg/l，氯化钙440mg/l，碘化钾0.83mg/l，硼酸6.2mg/l，硫酸锰22.3mg/l，硫酸锌8.6mg/l，钼酸钠0.25mg/l，硫酸铜0.025mg/l，氯化钴0.025mg/l，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l，硫酸亚铁27.8mg/l，肌醇100mg/l，甘氨酸2mg/l，盐酸硫胺素0.1mg/l，盐酸吡哆醇1.0mg/l，烟酸0.5mg/l，维生素h 1.0mg/l。7、所述一次增殖培养的方法为，将增殖芦笋试管苗，接种于nacl含量为9.5-10g/l，ph值为6.2的y-2增殖培养基中培养，控制培养温度为24-26℃，光照时间为每天12-14小时，光照强度为2500-3000lx，培养时间为16-20天；此时大部分组织会开始玻璃化，停止增殖，获得正常增殖的组织。8、所述一次增殖培养中，y-2增殖培养基的原料及含量为：ms培养基、6-ba 0.6-0.8mg/l、iaa 0.1mg/l、褪黑素0.05mg/l、蔗糖45g/l、琼脂粉5g/l；y-2增殖培养基中采用的ms培养基与前述步骤相同。9、所述二次增殖培养的方法为，将一次增殖培养后的正常增殖的组织，接种于nacl含量为3-3.5g/l，ph值为6.2的y-2增殖培养基中，继代培养30-40天，获得二次增殖组织。10、所述二次增殖培养中，y-2增殖培养基的原料及含量为：ms培养基、6-ba 0.6-0.8mg/l、iaa 0.1mg/l、褪黑素0.05mg/l、蔗糖45g/l、琼脂粉5g/l；y-2增殖培养基中采用的ms培养基与前述步骤相同。11、所述二次增殖培养中，培养温度为24-26℃，光照时间为每天12-14小时，光照强度为2500-3000lx。12、所述三次增殖培养的方法为，将二次增殖组织转入至na2co3含量为1.77g/l、na2so4含量为2.37g/l、nahco3含量为2.8g/l、nacl含量为1.95g/l，ph值为9.5的y-2增殖培养基中培养12-15天，此时大部分组织会出现失绿、变白、褐化直至死亡的情况；将存活的增殖组织转入nacl含量为3g/l，ph值为6.2的y-2增殖培养基中，继代培养30-40天，获得三次增殖组织。13、所述三次增殖培养中，y-2增殖培养基的原料及含量为：ms培养基、6-ba 0.6-0.8mg/l、iaa 0.1mg/l、褪黑素0.05mg/l、蔗糖45g/l、琼脂粉5g/l；y-2增殖培养基中采用的ms培养基与前述步骤相同。14、所述三次增殖培养中，培养温度为24-26℃，光照时间为每天12-14小时，光照强度为2500-3000lx。15、所述继代增殖培养的方法为，采用三次增殖组织重复一次增殖培养、二次增殖培养、三次增殖培养的操作两次，获得继代组织。16、所述生根培养的方法为，采用继代组织，截取茎尖或者直径在1.0-2.0mm范围内的茎段，转入y-3生根培养基中培养，控制培养温度为26-28℃，光照时间为每天14-16小时，光照强度为2500-3000lx，培养时间为21-30天，获得完整试管苗。17、所述生根培养中，y-3生根培养基的原料及含量为：1/2ms培养基、kt 0.05mg/l、iba 1.0mg/l、iaa 0.1mg/l、ancymidol 0.1mg/l、褪黑素0.05mg/l、蔗糖25g/l、琼脂粉5g/l；y-3生根培养基中采用的ms培养基与前述步骤相同；1/2ms表示前面所述改良ms培养基中大量元素含量为原有水平的50%。18、所述转接培养的方法为，将获得的完整试管苗接种于na2co3含量为1.77g/l、na2so4含量为2.37g/l、nahco3含量为2.8g/l、nacl含量为1.95g/l，ph值为9.5的y-4转接培养基中培养，控制培养温度为26-28℃，光照时间为每天14-16小时，光照强度为2500-3000lx，培养时间为21-28天；获得健壮的试管苗，并进行过渡移栽种植，完成创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培，获得耐中重度盐碱芦笋种质。19、所述转接培养中，y-4转接培养基的原料及含量为：1/2ms培养基、褪黑素0.05mg/l、蔗糖18g/l、琼脂粉2.5g/l；y-4转接培养基中采用的ms培养基与前述步骤相同；1/2ms表示前面所述改良ms培养基中大量元素含量为原有水平的50%。20、与现有技术相比，本发明的有益效果为：21、1）本发明的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法中，通过对芦笋笋条进行启动培养后，依次重复采用三次特定含量及ph的高盐胁迫诱导（一次增殖培养）、特定含量及ph的低盐胁迫诱导（二次增殖培养）、特定盐碱成分组成、含量及ph的盐碱混合胁迫诱导（三次增殖培养），同时在一至三次增殖培养中采用含有特定含量褪黑素和iaa的培养基，进行创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培，能够获得耐受含盐量大于6‰，ph值大于8.5的芦笋种质，弥补现有技术对于耐中重度盐碱芦笋新品种选育方法方面的研究不足，克服现有的芦笋种质资源仅能够适应于低度盐碱地种植，无法耐受中重度盐碱土壤环境的问题；同时，通过本发明的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，创制获得的芦笋种质的耐盐碱性能稳定，适用于规模化作业。22、2）经试验，采用本发明的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，创制获得的耐中重度盐碱芦笋种质试管苗，在na2co3含量为1.77g/l、na2so4含量为2.37g/l、nahco3含量为2.8g/l、nacl含量为1.95g/l，ph值为9.5的培养基中培养20天，试管苗能够有效适应高盐碱环境，对高盐碱环境的应激反应不明显，生长状态良好，根系正常生长，表现出拟叶密，分枝多的特性。23、3）本发明的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，能够有效克服现有创制芦笋耐盐碱种质方法存在的育年限长、育种效率低下、创制成本高的问题；有效提高育种效率，减少育种年限，采用本发明的组培方法仅需要1年半的时间就可以获得大量的耐中重度盐碱芦笋种质。24、4）本发明的创制耐中重度盐碱芦笋种质的组培方法，能够为耐盐碱芦笋品种的选育提供大量耐高度盐碱的试验基础材料，加快耐盐碱芦笋品种的选育进程，也有利于耐盐碱芦笋品种的多样性；同时，耐盐碱芦笋品种的选育将会为中重度盐碱地的开发利用提供新的方向，进一步提高中重度盐碱土地的利用率，增加盐碱地经济收益。