一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法

本发明涉及植物线虫病害，具体涉及一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法。背景技术：1、根结线虫meloidogyne spp.是威胁我国番茄生产的最重要病原物类群之一，寄主达3000多种，每年造成的蔬菜损失价值高达5亿美元，目前缺乏安全高效的防治方法。长期以来，对于根结线虫的防治都是采用化学药剂，直接灌根或随水施用，导致大量药剂残存于土壤中，产生药害的同时，对土壤破坏极大，危害环境及人类健康。六七十年代最主要使用的杀线虫剂，包括卤代烃和异硫氰酸甲酯类两大类型，这些熏蒸剂的施用方法主要为土壤熏蒸，虽然可达到彻底杀灭线虫的效果，但同时也会杀死土壤中的其他生物，影响土壤活性、破坏生态调控，对环境造成巨大的破坏，甚至有的对人体有致癌作用，部分地区药害严重，甚至影响到了作物生长和人类生活。因此绿色环保的杀线虫制剂成为当前研究发展的热点。2、颗粒剂具有改善和提高物质外观及其性质的能力，能够存储细微状态的物质的能力，并在需要时释放该物质，发挥相应的药效作用。颗粒剂之所以被广泛地应用于工业，是由于颗粒剂化改变了原药剂的表面性质，而使接触毒性、药害、令人不愉快的气味和易燃性等大为降低，减少了对环境的污染。3、因此，开发出一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法尤为重要。技术实现思路1、本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，该方法制备的防治根结线虫病颗粒剂具有药效长、药害低、防治效果佳和促进植物生长的作用。2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，该方法包括以下步骤：3、s1、将哈茨木霉菌落活化后加入无菌水，得到1×109cfu/ml的木霉孢子悬浮液，然后加入pd液体培养基中，在一定条件下振荡培养，得到木霉发酵液；再将枯草芽孢杆菌菌株活化后，得到1×108cfu/ml的枯草芽孢杆菌孢子悬浮液，然后加入lb液体培养基中，在一定条件下振荡培养，得到枯草芽孢杆菌发酵液；4、s2、在废弃茶渣中加入水，得到茶渣废弃液，将所述茶渣废弃液进行振荡培养，静置后进行过滤，得到茶渣发酵滤液；在印楝油中加入水，得到印楝油溶液，将所述印楝油溶液进行振荡培养，静置后进行过滤，得到印楝油发酵滤液；5、s3、将s1中得到的木霉发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液与s2中得到的茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液混合均匀，加入交联剂进行交联反应，然后加入一次加固剂进行加固反应，再加入二次加固剂进行二次加固反应，反应后进行摇床培养，然后依次进行静置、过滤和干燥，得到防治根结线虫病颗粒剂。6、优选地，s1中所述pd液体培养基的配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g和蒸馏水1000ml，所述pd液体培养基的ph值为7；所述lb液体培养基的配方为：蛋白胨10g、氯化钠5g、酵母提取物5g，加蒸馏水至1.0l，所述lb液体培养基的ph值为7。7、优选地，s1中所述1×109cfu/ml的木霉孢子悬浮液和pd液体培养基的体积比为1:14；所述1×108cfu/ml的枯草芽孢杆菌孢子悬浮液和lb液体培养基的体积比为1:14。8、优选地，s1中所述振荡培养的温度均为28℃、速率均为180r/min，培养时间均为7d。9、优选地，s2中所述茶渣废弃液的质量浓度为50g/l，所述印楝油溶液的质量分数为70％。10、优选地，s2中所述振荡培养的温度均为28℃、速率均为200r/min，培养时间均为7d。11、优选地，s3中所述交联剂为质量浓度为2-4％的羧甲基纤维素水溶液，所述交联反应的时间为12-18h；所述一次加固剂为质量浓度为1-2％的壳聚糖水溶液，所述加固反应的时间为22h；所述二次加固剂为质量浓度为2-3％的海藻酸钠水溶液，所述二次加固反应的时间为24h。12、优选地，s3中所述木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液的体积比为1:1:1:1。13、优选地，s3中所述木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液的总体积、交联剂、一次加固剂和二次加固剂的体积比为4000:11:41:16。14、优选地，s3中所述摇床培养的温度为28℃、速率为130r/min，培养时间为24h；所述静置的时间为4h。15、本发明与现有技术相比具有以下优点：16、1、本发明将印楝油发酵滤液、茶渣发酵滤液和两种生物菌发酵液混合制备出一种具有药效长、药害低、防治效果佳和促进植物生长的生物菌肥药剂。17、2、目前，防治根结线虫的药剂基本都是一些化学药剂，都有着成本高，药害强的特点。现有防治线虫效果比较好的生物药剂有阿维菌素，但是阿维菌素对人体有着很强的毒害作用，会损伤人的神经、消化和循环系统，在使用过程中会给人的健康带来很大的影响。而本发明制备的防治根结线虫病颗粒剂中，印楝油、茶渣、枯草芽孢杆菌和木霉都是源于自然的绿色物质，无论对人还是蔬菜都不会产生毒性，并减少环境污染；四种物质的使用，实现了废弃物资源化的同时，还能增加土壤的微生物的多样性，与土传病原菌形成竞争关系，使植物发病率减少。其中，印楝油具有很强的拒食、毒杀昆虫的作用；而木霉和枯草芽孢杆菌是一种益生菌，能刺激人体免疫器官的生长发育，提高群体免疫力；茶渣废弃液中含有茶多酚、咖啡碱、粗蛋白、粗纤维和氨基酸等物质，茶渣发酵滤液能很好地通过微生物间的拮抗作用，降低有害菌的毒性，并能与其他菌剂混合制成生物有机肥，改善植物根的吸收力。这使防治根结线虫病颗粒不仅仅有抗线虫的作用，还具有增肥、抗菌、杀虫等作用。18、3、本申请中将印楝油发酵滤液、茶渣发酵滤液和两种生物菌发酵液制成颗粒后，可以稳定印楝油原药，延长药效，提高残存有效成分的活性，减少原药挥发而导致的损失，也可以屏蔽原油的刺激性味道和气味。另外，因为药物制为固体颗粒，所以容易避免与其他农药或助剂的混合发生化学反应，有利于制剂加工。19、下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。技术特征：1.一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s1中所述pd液体培养基的配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g和蒸馏水1000ml，所述pd液体培养基的ph值为7；所述lb液体培养基的配方为：蛋白胨10g、氯化钠5g、酵母提取物5g，加蒸馏水至1.0l，所述lb液体培养基的ph值为7。3.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s1中所述1×109cfu/ml的木霉孢子悬浮液和pd液体培养基的体积比为1:14；所述1×108cfu/ml的枯草芽孢杆菌孢子悬浮液和lb液体培养基的体积比为1:14。4.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s1中所述振荡培养的温度均为28℃、速率均为180r/min，培养时间均为7d。5.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s2中所述茶渣废弃液的质量浓度为50g/l，所述印楝油溶液的质量分数为70％。6.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s2中所述振荡培养的温度均为28℃、速率均为200r/min，培养时间均为7d。7.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s3中所述交联剂为质量浓度为2-4％的羧甲基纤维素水溶液，所述交联反应的时间为12-18h；所述一次加固剂为质量浓度为1-2％的壳聚糖水溶液，所述加固反应的时间为22h；所述二次加固剂为质量浓度为2-3％的海藻酸钠水溶液，所述二次加固反应的时间为24h。8.根据权利要求7所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s3中所述木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液的体积比为1:1:1:1。9.根据权利要求8所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s3中所述木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液的总体积、交联剂、一次加固剂和二次加固剂的体积比为4000:11:41:16。10.根据权利要求1所述的一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，其特征在于，s3中所述摇床培养的温度为28℃、速率为130r/min，培养时间为24h；所述静置的时间为4h。技术总结本发明提供了一种防治根结线虫病颗粒剂的制备方法，该方法为：用哈茨木霉菌落制备木霉发酵液，再用枯草芽孢杆菌菌株制备枯草芽孢杆菌发酵液；在废弃茶渣中加入水，得到茶渣废弃液；在印楝油中加入水，得到印楝油溶液；将茶渣废弃液和印楝油溶液分别振荡培养，静置后过滤，得到茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液；将木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、茶渣发酵滤液和印楝油发酵滤液混合，加入交联剂进行反应，然后加入一次加固剂进行加固反应，再加入二次加固剂进行二次加固反应，反应后进行摇床培养，依次进行静置、过滤和干燥，得到防治根结线虫病颗粒剂。本发明制备的防治根结线虫病颗粒剂具有药效长、药害低、防治效果佳和促进植物生长的作用。技术研发人员：林丽飞,杨文梅,刘春国,洪亮,徐永泽,李亚楠,刘芸君受保护的技术使用者：红河学院技术研发日：技术公布日：2024/3/31