一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备及防治大黑鳃

本发明属于农作物病虫害防治，尤其涉及一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备及防治大黑鳃金龟幼虫的方法。背景技术：1、大黑鳃金龟 holotrichia oblita属鞘翅目（coleoptera）鳃金龟科（melolonthidae），是土栖金龟子中的一个优势种，其幼虫称为蛴螬，对农作物、林苗等为害严重；据统计，植物地下部分受害有86%是蛴螬为害造成的，该虫一般1年发生1代，其3龄幼虫食量大，活动能力强，多在花生、大豆等油料和其他作物田的土壤中发生为害，从东北到西北到西南再到华南，几平全国范围都有华北大黑鳃金龟的分布。 2、目前对大黑鳃金龟幼虫的防治以化学防治和生物防治为主，化学防治剂包括噻虫胺、噻虫嗪、氯虫苯甲酰胺、辛硫磷、多福克、克百威、毒死蜱、二嗪磷等，其剂型包括颗粒剂、微囊悬浮剂、种子处理悬浮剂、悬浮种衣剂等；生物防治剂包括苏云金芽孢杆菌、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌、昆虫病原线虫等，其剂型包括可湿性粉剂、悬浮剂、可分散油悬浮剂、水分散粒剂、母药等。3、化学防治方法虽然快速高效，但是对环境和粮食安全不利，且受到大黑鳃金龟幼虫地下觅食模式的限制，使杀虫剂难以接近它们，最终导致土壤施用杀虫剂的剂量通常远高于叶面杀虫剂；而生物防治剂，尤其是昆虫病原线虫，具有专性寄生、杀虫速度快、易于大量扩繁、对环境及非靶标生物无副作用等优点，在大黑鳃金龟幼虫的绿色防控中应用潜力巨大，但是目前昆虫病原线虫的应用存在不易运输、抗逆能力差、货架期短等局限性。因此亟需一种便于贮存、运输且能维持昆虫病原线虫高存活率和高致病力的新型制剂来防治大黑鳃金龟幼虫。4、昆虫病原线虫（entomopathogenic nematodes,epn）是一种专性寄生昆虫的线虫。大量研究证明，这类线虫可侵染和杀死鳞翅目和鞘翅目等昆虫幼虫，对环境、植物及非靶标生物无副作用，在害虫生物防治中发挥着重要作用；肠道内携带共生菌的侵染期线虫（infective juveniles,ijs）自由生活在土壤环境中，主动寻找并侵入合适的寄主，随后释放体内共生细菌到寄主昆虫血腔内，细菌迅速繁殖并产生毒素，使寄主于48 h内患败血症而死亡；线虫和细菌利用寄主体内组织作为营养进行繁殖；当寄主体内营养消耗殆尽，侵染期线虫从寄主体内爬出并寻找新的寄主，进而形成昆虫病原线虫的可持续性防治。5、海藻酸钠溶液滴入含有二价阳离子（例如 ca2+）的交联溶液中，液滴会在几毫秒内通过离子凝胶作用从液滴表面开始向内凝固，其中钙离子与带负电的离子发生反应，聚合物形成一个含有水的三维刚性结构，即水凝胶；通过这些水，钙离子将扩散到液滴中，从外到内地交联起来形成最终的胶囊。这种固定微生物和酶的凝胶化方法在海藻酸盐利用方面得到了很好的研究，海藻酸钠和氯化钙的交联也是配制生物防治胶囊最广泛使用的材料，不仅简单易取，而且成本低廉，适合田间的大规模示范推广；胶囊制剂较传统的线虫溶液制剂的施用方式，极大地提高了使用过程中的便携性和稳定性。技术实现思路1、有鉴于此，本发明的在于提供一种新的昆虫病原线虫制剂及其在大黑鳃金龟幼虫防治中的应用方法。2、为解决上述问题，本发明采取了如下技术方案：3、本发明的一个技术方案在于提供一种昆虫病原线虫胶囊制剂，包括海藻酸钠、甘油、甲醛、无水氯化钙和昆虫病原线虫；所述昆虫病原线虫为 heterorhabditis  beicherriana lf；所述试剂在胶囊制剂中的占比为：海藻酸钠占比0.30-1.80%，甘油占比6.00-24.00%，甲醛占比0.01-0.075%，交联剂：无水氯化钙和甘油混合溶液，分别占比0.30-1.80%和6.00-24.00%。 4、作为进一步的优选，所述试剂在胶囊制剂中的占比为：海藻酸钠占比0.30%，甘油占比6.00%，甲醛占比0.075%，交联剂：无水氯化钙和甘油混合溶液，分别占比2.00%和6.00%。5、作为进一步的优选，所述昆虫病原线虫在所述昆虫病原线虫胶囊制剂中的含量为每颗胶囊中昆虫病原线虫的含量为50-200ijs。6、本发明的第二个技术方案在于提供一种昆虫病原线虫胶囊制剂在防治大黑鳃金龟幼虫中的应用方法。7、进一步的优选为，施用胶囊前需将胶囊浸入水中8-16h以打破甘油对线虫的休眠效果。8、进一步的优选为，每头大黑鳃金龟幼虫需要1-4颗胶囊，每颗胶囊中昆虫病原线虫的含量为50-200ijs。9、胶囊基质溶液中的甘油成分，可以确保昆虫病原线虫处于休眠状态，避免线虫在胶囊制备过程中的应激反应，减少胶囊中线虫的基础代谢和能量消耗，从而大大提高胶囊中线虫的货架期；通过复水可以打破线虫的休眠，实现胶囊的灵活施用；胶囊中含有少量的甲醛，可以在不伤害线虫的前提下，显著提高线虫的货架期。10、本发明具有如下有益效果：11、本发明以制备一种昆虫病原线虫胶囊制剂为目的，依托海藻酸钠和氯化钙交联形成的水凝胶作为封装昆虫病原线虫的载体，克服了线虫溶液不易运输和存储的难题，提高了昆虫病原线虫的抗逆性；甘油和甲醛成分解决了昆虫病原线虫难以制备成制剂和货架期短的问题；本发明还引入了昆虫病原线虫胶囊配套的应用方法，在防治大黑鳃金龟幼虫方面具有良好的防效；此外，昆虫病原线虫胶囊制备所需的所有材料都具有简单易取，成本低廉，适合田间的大规模示范推广，具有广泛的应用前景。技术特征：1.一种昆虫病原线虫胶囊制剂，其特征在于，包括海藻酸钠、甘油、甲醛、无水氯化钙和昆虫病原线虫，溶剂为超纯水；所述昆虫病原线虫为heterorhabditis beicherriana lf；所述试剂在胶囊制剂中的占比为海藻酸钠占比0.30-1.80%，甘油占比6.00-24.00%，甲醛占比0.01-0.075%，交联剂：无水氯化钙和甘油混合溶液，分别占比0.30-2.0%和6.00-24.00%。2.如权利要求1所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂，其特征在于，各组分最佳配比为海藻酸钠占比0.30%，甘油占比6.00%，甲醛占比0.075%，交联剂：无水氯化钙和甘油混合溶液，分别占比2.00%和6.00%。3.如权利要求1所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂，其特征在于，所述昆虫病原线虫在所述单颗胶囊制剂中的含量为50ijs～4000ijs。4.如权利要求1-3所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备方法，其特征在于，具体制备方法包括以下步骤：5.如权利要求4所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备方法，其特征在于，侵染期线虫溶液与基质溶液体积比为2：100。6.如权利要求4所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备方法，其特征在于，蠕动泵的工作速度为0.1-5rpm。7.如权利要求4所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备方法，其特征在于，保存条件为4-25℃，至少保存6个月。8.如权利要求1-3所述的一种昆虫病原线虫胶囊制剂在防治大黑鳃金龟幼虫中的应用方法。9.如权利要求8所述的应用方法，其特征在于，施用胶囊前需将胶囊浸入水中8-16h以打破甘油对线虫的休眠效果。10.如权利要求8所述的应用方法，其特征在于，每头大黑鳃金龟幼虫需要1-4颗胶囊，每颗胶囊中昆虫病原线虫的含量为50-200ijs。技术总结本发明公开了一种昆虫病原线虫胶囊制剂的制备及防治大黑鳃金龟幼虫的应用方法，昆虫病原线虫胶囊制剂包括海藻酸钠、甘油、甲醛、无水氯化钙和昆虫病原线虫，溶剂为超纯水；所述昆虫病原线虫为Heterorhabditis beicherriana LF；所述试剂在胶囊制剂中的占比为海藻酸钠占比0.30‑1.80%，甘油占比6.00‑24.00%，甲醛占比0.01‑0.075%，交联剂：无水氯化钙和甘油混合溶液，分别占比0.30‑2.0%和6.00‑24.00%。本发明克服了昆虫病原线虫原液制剂不易运输和存储的难题，提高了昆虫病原线虫的抗逆性，还引入了昆虫病原线虫胶囊配套的应用方法，在防治大黑鳃金龟幼虫方面具有良好的防效。技术研发人员：李克斌,尹姣,崔程龙,王志敏,屈亚飞,董欢欢,李红年受保护的技术使用者：中国农业科学院植物保护研究所技术研发日：技术公布日：2024/3/31