一种青蒿茎的外组织诱导培养方法与流程

本发明涉及外组织培养，具体而言，涉及一种青蒿茎的外组织诱导培养方法。背景技术：1、青蒿素是一种从青蒿植物中提取的药物成分，也被称为抗疟疾药物，目前青蒿植物中的青蒿素含量普遍偏低，为了提高青蒿素的产量和质量，一般会利用组织培养技术进行青蒿组织培养体系的建立，选育出青蒿素含量高的优良品种。2、组织培养技术通常采用外组织诱导培养，现有的诱导方法通常先建立青蒿组织培养下快速繁殖体系进行青蒿愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，试管苗的扩大繁殖及生根后对其进行形态学观察筛选，但这个方法在化学诱导过程中，由于培养基的主要成分中含有微量的抑制植物生长的物质，容易导致青蒿生长发育不良，从而使得青蒿茎中的青蒿素含量偏低，青蒿素产量也难以提高。3、因此亟待开发一种发育良好的青蒿茎的外组织诱导培养方法，来解决上述问题。技术实现思路1、为了解决上述技术缺陷，本发明研究出一种青蒿茎的外组织诱导培养方法，包括以下步骤：2、s1：对琼脂的预处理3、将琼脂、氯化钡和去离子水混合，加热得混合溶液，随后倒入超声波搅拌器，随后进行过滤，将滤液转移至蒸馏瓶中进行蒸馏，冷却至室温后，得到预处理琼脂；4、s2：蔗糖琼脂的制备5、将6-氨基葡萄糖和蔗糖混合，加入去离子水，搅拌使其充分溶解，保持恒温搅拌，冷却至室温后进行过滤，随后将滤液放置于干燥箱内烘干，得到预处理蔗糖，将预处理琼脂与预处理蔗糖加入去离子水，加热后恒温搅拌，随后放入恒温箱中保温，得到蔗糖琼脂；6、s3：青蒿茎的外组织诱导培养7、剪取青蒿外组织，先进行消毒，随后将外组织切成茎段，将茎段插入诱导培养基中培养，直至诱导培养形成丛生芽；8、s4：丛生芽的增殖培养和生根培养9、将丛生芽转入增殖培养基培养，直至丛生芽伸长，将丛生芽切割并接种到生根培养基培养，直至生根，生根后将其移栽至基质中炼苗，得到青蒿苗。10、进一步地，步骤s1对琼脂的预处理，包括以下步骤：11、s1.1：将琼脂、氯化钡和去离子水以质量比(6-10)：1：(16-20)混合，以6-8℃/min的加热速率加热至80-90℃，得混合溶液，备用；12、s1.2：将步骤s1.1得到的混合溶液倒入超声波搅拌器，设定超声波搅拌器输出功率为700-800w，搅拌时间设定为40-50s，搅拌过程中保持温度恒定在80-90℃；13、s1.3：将超声波导杆插入到液面以下15-25mm处，启动超声波搅拌器，搅拌完成后得到反应溶液，备用；14、s1.4：将步骤s1.3得到的反应溶液进行过滤，随后将滤液转移至蒸馏瓶中进行蒸馏，蒸馏温度为90-100℃，蒸馏时间为30-60min冷却至室温后，得到预处理琼脂。15、进一步地，步骤s2蔗糖琼脂的制备，包括以下步骤：16、s2.1：将6-氨基葡萄糖和蔗糖以质量比1：(6-10)混合，得混合物，备用；17、s2.2：在步骤s2.1得到的混合物中以质量比1：(4-6)加入去离子水，搅拌15-20min，使混合物充分溶解，得到蔗糖溶液，备用；18、s2.3：将步骤s2.2得到的蔗糖溶液以6-8℃/min的加热速率加热至60-80℃，随后保持恒温搅拌15-20min，冷却至室温后进行过滤，得滤液，备用；19、s2.4：将步骤s2.3得到的滤液放置于干燥箱内烘干，得到预处理蔗糖；20、s2.5：将步骤s1.4得到的预处理琼脂与步骤s2.4得到的预处理蔗糖以质量比1：(1.5-2.5)：(4-6)加入去离子水，以6-8℃/min的加热速率加热至80-90℃，保持温度为80-90℃搅拌15-20min，得溶液a，备用；21、s2.6：将步骤s2.5得到的溶液a放入50-60℃的恒温箱中保温40-50min，得到蔗糖琼脂。22、进一步地，步骤s3青蒿茎的外组织的诱导培养，包括以下步骤：23、s3.1：剪取青蒿上部较幼嫩且具有茎叶的茎段为外组织，备用；24、s3.2：将步骤s3.1得到的外组织用70-85％浓度的酒精浸泡消毒50-70s，随后在1-3％浓度的次氯酸钠浸泡消毒80-100s，再使用无菌水清洗5-15次，随后将外组织切成长度为1.0-2.0cm的茎段，备用；25、s3.3：将步骤s3.2中得到的茎段用无菌水清洗4-6次，擦干表面水分后插入诱导培养基中，诱导培养基以ms培养基为基底，加入质量比1：1：1：1的1.5-2.5mg/l的6-ba、0.1-0.2mg/l的naa和28-44g/l的蔗糖琼脂后制备得到，将诱导培养基放在全暗条件下培养20-30d，然后置于每天光照12-16h，光照强度为2000-4000lux，温度为20-26℃的条件下培养，直至诱导培养形成丛生芽。26、进一步地，步骤s4丛生芽的增殖培养和生根培养，包括以下步骤：27、s4.1：将步骤s3.4得到的丛生芽转入增殖培养基进行增殖培养，接种后先在20-26℃全暗环境下培养至萌生侧芽，随后置于每天光照14-18h，28、s4.3：步骤s4.2的丛生芽生根30-32d后，在去离子水中光照强度为2000-4000lux，温度为20-26℃的条件下培养，直至丛生芽伸长至4-6cm；29、s4.2：将步骤s4.1得到的长度约为4-6cm的丛生芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养；30、洗涤根部，随后将其移栽至基质中炼苗，得到青蒿苗。31、进一步地，步骤s4.1中的增殖培养基为：以ms培养基为基底，加入质量比为1：1的1.5-2.0mg/l的6-ba和0.1-0.2mg/l的naa后制备得到。32、进一步地，步骤s2.4的烘干条件为，温度设定50-60℃，烘干时间为4-5h。33、进一步地，步骤s4.2中的生根培养基为：以ms培养基为基底，加入质量比为1：1的0.1-0.2mg/l的iba和0.3-0.7mg/l活性炭后制备得到。34、进一步地，步骤s4.2的生根培养条件为：20-26℃全暗环境下培养10-12d，随后置于每天光照14-18h，光照强度为2000-4000lux，温度为20-26℃的条件下培养，直至生根。35、进一步地，步骤s4.3中的基质为黄心土：河沙：腐殖土以质量比(2.5-3.5)：(1.5-2.5)：1混合。36、本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：37、1、本发明通过琼脂、氯化钡和去离子水混合，得到预处理琼脂，通过钡离子与硫酸根离子反应，生成沉淀，从而降低硫酸根离子含量，进而使得琼脂内部毒性减少，从而提高培养效果，进而使得青蒿诱导培养过程中生长发育良好，解决传统诱导过程中青蒿生长发育不良的问题。38、2、本发明通过将6-氨基葡萄糖和蔗糖混合后于预处理琼脂混合，得到蔗糖琼脂，通过制备蔗糖琼脂加入诱导培养基中相比单独将蔗糖加入诱导培养基中，可以使青蒿外组织更好的吸收蔗糖中的养分，促进青蒿的生长发育，且制备蔗糖琼脂中加入的预处理蔗糖相比原蔗糖可以额外提供细胞生长所需的氮源，加快细胞的生长速度和改善细胞的生长质量，使得青蒿诱导培养过程中生长发育良好，从而解决青蒿生长发育不良的问题。39、3、本发明通过将琼脂、去离子水与氯化钡混合倒入超声波搅拌器，得到预处理琼脂，通过超声波搅拌方式来替换传统的磁力搅拌方式，超声波的高频振动能够快速而均匀地将液体中的氯化钡和琼脂分散和悬浮，使得琼脂、去离子水与氯化钡能够在短时间内实现高效的混合效果，快速反应将硫酸根离子含量降低。