一种蝙蝠葛组培培养基和组培方法

本发明属于植物组培，具体涉及一种蝙蝠葛组培培养基和组培方法。背景技术：1、蝙蝠葛(menispermum dauricum dc.)为防己科蝙蝠葛属多年生草本，根状茎褐色，垂直生；茎自位于近顶部的侧芽生出；叶纸质或近膜质，心状扁圆形，基部心形至近截平，两面无毛；圆锥花序单生或有时双生；果紫黑色；花期6～7月，果期8～9月；因叶形似张开翅膀的蝙蝠，故名“蝙蝠葛”。2、蝙蝠葛分布于中国东北、华北等地，生于山坡、路旁或沟边灌草丛。蝙蝠葛喜温暖湿润环境，耐寒、耐旱；对土壤要求不严，在排水良好、肥沃、疏松的土壤中栽培长势较好。3、蝙蝠葛味苦、性寒；有小毒；归肺、胃、大肠经；具有清热解毒，利湿消肿的功效，主治急性咽喉炎、扁桃体炎、牙龈肿痛、肺热咳嗽、湿热、黄疽、便秘等症。蝙蝠葛还适宜作花架、镂空护栏、路垣及假山石等垂直绿化，也可作地被栽植。虽然在药用和观赏方面具有一定的应用价值，但对蝙蝠葛的繁殖技术研究不多。4、目前，蝙蝠葛常采用带节茎段繁殖和分株繁殖的方式进行繁殖。以带节茎段繁殖时，由于蝙蝠葛的果实为核果，秋季成熟时采收，去外层肉质果皮，晾晒后保存，次年春天再催芽后育苗、移栽，步骤繁多，且会由于核果不易保存导致发芽率不高。而扦插繁殖一般是将1～2年生根茎剪成约10cm长的小段，并用生长素处理后进行定植。春、秋两季均可进行，缺点是繁殖系数较低。技术实现思路1、本发明的目的提供一种蝙蝠葛组培培养基和组培方法，应用本发明提供的组培培养基和组培方法进行蝙蝠葛组培，诱导率高、分化率高和生根率高，繁殖系数高，能够获得大量一致性好、健壮的植株，为蝙蝠葛规模化栽培提供技术支撑。2、为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：3、本发明提供了一种蝙蝠葛组培培养基，所述组培培养基包括诱导培养基、愈伤组织分化培养基、壮芽培养基和生根培养基；4、所述诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.4～0.8mg/l 6-ba、0.1～0.3mg/lnaa、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；5、所述愈伤组织分化培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2～0.5mg/l6-ba、0.1～0.2mg/lnaa、1.0～1.5mg/l碳纳米管、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；6、所述壮芽培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2～0.3mg/l 6-ba、0.1～0.2mg/lnaa、40g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；7、所述生根培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～0.8mg/l iba，0.5～2.0mg/l碳纳米管、40g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂。8、优选的，所述诱导培养基的ph值为5.75～5.85，所述愈伤组织分化培养基的ph值为5.75～5.85，所述壮芽培养基的ph值为5.75～5.85，所述生根培养基的ph值为5.75～5.85。9、本发明提供了一种蝙蝠葛愈伤组织的组培方法，所述组培方法采用上述技术方案所述的组培培养基，包括以下步骤：10、将所述蝙蝠葛的带节茎段接种于诱导培养基进行诱导培养，得到蝙蝠葛愈伤组织；11、将所述蝙蝠葛愈伤组织转接于愈伤组织分化培养基进行分化培养，得到蝙蝠葛丛生芽；12、将所述蝙蝠葛丛生芽转接于壮芽培养基进行壮芽培养，得到无根苗；13、将所述无根苗转接于生根培养基进行生根培养，得到生根苗。14、优选的，所述带节茎段通过如下方式获得：取蝙蝠葛茎第二到第四节，去除叶片，保留节，并剪成长度为2.0～3.0cm的带节小段。15、优选的，所述诱导培养、分化培养、壮芽培养和生根培养的温度分别为24～26℃。16、优选的，所述分化培养、壮芽培养和生根培养均在光照条件下进行，所述光照的时间分别为12～16h/d，所述光照的强度分别为800～1200lx。17、优选的，所述诱导培养在黑暗条件下进行。18、优选的，所述诱导培养的时间为30～45d；所述分化培养的时间为30～40d；所述壮芽培养的时间为25～30d；所述生根培养的时间为30～35d。19、优选的，得到生根苗后，还包括炼苗和移栽培养；20、所述炼苗在室内完成，所述炼苗的时间为4～6d；21、所述移栽培养在室内完成，所述移栽培养用基质包括泥炭土、珍珠岩和田园土；所述泥炭土、珍珠岩和田园土的体积比为(1～2)：(1～2)：(0.5～1.0)。22、优选的，所述接种前，还包括对蝙蝠葛带节茎段进行清洗和消毒；23、所述清洗包括洗涤剂清洗和流水冲洗，所述洗涤剂清洗时间为20～30min，所述流水冲洗时间为1～1.5h；24、所述消毒包括：先用质量浓度70％～75％酒精浸泡30～45s，用无菌水冲洗2～3次；再用质量浓度为2.5～3.5％次氯酸钠溶液浸泡20～30min；最后用无菌水冲洗4～5次。25、本发明的有益效果：本发明提供了一种蝙蝠葛组培培养基，所述组培培养基包括诱导培养基、愈伤组织分化培养基、壮芽培养基和生根培养基；26、所述诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.4～0.8mg/l 6-ba、0.1～0.3mg/lnaa、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；27、所述愈伤组织分化培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2～0.5mg/l6-ba、0.1～0.2mg/lnaa、1.0～1.5mg/l碳纳米管、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；28、所述壮芽培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2～0.3mg/l 6-ba、0.1～0.2mg/lnaa、40g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；29、所述生根培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～0.8mg/l iba，0.5～2.0mg/l碳纳米管、40g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂。30、在本发明提供的组培培养基中，6-ba(6-苄氨基嘌呤)刺激细胞分裂促进蝙蝠葛生长和发育，促进愈伤组织的形成；naa(1-萘乙酸)促进蝙蝠葛愈伤组织的分化、丛生芽的生长和壮苗；iba(吲哚丁酸)促进根的生长；碳纳米管可以促进蝙蝠葛愈伤组织的形成及幼苗的生长；6-ba、naa、iba和碳纳米管共同作用下利于诱导蝙蝠葛愈伤组织形成和分化，获得大量的丛生芽和组培苗，进而获得一致性好、健壮的植株。实施例结果表明：利用本发明的组培培养基可以获得大量的丛生芽和组培苗，最终获得一致性好、健壮的蝙蝠葛组培苗植株。可见本发明通过所述诱导培养基、愈伤组织分化培养基、壮芽培养基和生根培养基的应用效果好，各个组分之间相互协同作用，在适宜的组分浓度控制下可以获得一致性好、健壮的蝙蝠葛组培苗植株，将为其规模化栽培提供技术支撑。