金耳孢子育种方法与流程

本发明涉及食用菌栽培，具体涉及一种金耳孢子育种方法。背景技术：1、金耳是耳包革科、耳包革属真菌。担子果大型，半球形至不定型块状，全体呈脑状至分裂为数个具深沟槽而粗厚的裂瓣，直径3-12厘米，高2-8厘米。子实层遍生外露表层，为一宽广疏松包含着担子的区域；原担子初椭圆形至卵形；成熟下担子球形、近球形，稀有梨形至具短柄状基部，长13-25微米，宽11.5-19.5微米。金耳分布于中国福建、四川、云南、陕西、山西、贵州、西藏等高海拔林带，以滇西北及西藏东南部多产。多生长于夏、秋季，在海拔1800-3200米范围内生长较多，常单生或群生于阔叶林、针阔混交林中的壳斗科、桦木科等阔叶树朽木上。金耳含有丰富脂肪，蛋白质和磷、硫、锰、铁、镁、钙、钾等微量元素，是一种营养滋补品，并可作为药用。其性温中带寒，味甘，能化痰、止咳、定喘、调气，平肝肠，主治肺热、痰多，感冒咳嗽、气喘、高血压等病症。2、由于金耳具有很高的食用和药用价值，且野生金耳价高量少，因此进行人工培育。现有的金耳育种培育工艺，通常采用单孢分离法，在显微镜下操作分离金耳孢子，该方法操作要求高，且培育步骤繁琐，培育时间长，无法满足实际的生产需要，因此，提供一种操作简单、培育时间更短的金耳孢子育种方法。技术实现思路1、(一)解决的技术问题2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种金耳孢子育种方法，解决了现有培育方法操作要求高、培育步骤繁琐、培育时间长的技术问题。3、(二)技术方案4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：5、金耳孢子育种方法，所述方法为：将金耳子实体悬勾培养，待子实体中的孢子分离出后，将孢子移入灭菌的筛选平板培养基上培养出金耳单菌落，随机挑取两个金耳单菌落在同一个灭菌出耳平板培养基上划出相交线进行杂交培养，同时接入毛韧革菌液体菌种作为发菌辅助，在平板培养基或试管中涂布均匀，诱导出耳；发菌辅助原理为：毛韧革菌菌丝分泌产物，诱导金耳孢子萌发产生菌丝；毛韧革菌菌丝菌丝吸收营养物质，为金耳子实体产生提供营养。6、具体步骤为：7、s1.金耳子实体处理：8、选择品质优良的金耳子实体，切成4～5cm方块，在金耳子实体表面均匀喷洒酒精进行消毒；9、s2.灭菌：10、将装有蒸馏水的培养瓶悬勾121℃高压高湿灭菌，蒸馏水含量为20ml，培养瓶容量为500ml；11、s3.收集孢子：12、使用紫外灯照射15min对超净工作台进行消毒，将培养瓶与金耳子实体方块都放置于超净工作台，对镊子进行消毒，夹起金耳子实体方块挂在勾子上，吊入培养瓶中，避光20℃培养2天，收集金耳孢子；13、s4.孢子处理：14、收集完成后，在超净工作台中取下培养瓶瓶盖与金耳子实体方块，再用移液枪吸取底部含有孢子的蒸馏水到灭菌的筛选平板培养基上，晃动使其均匀分布；15、s5.孢子培养：16、将筛选平板培养基放在避光处，20℃培养4～5天，可出现多个肉眼可见单菌落；17、s6.杂交诱导出耳：18、随机挑取一个金耳单菌落在灭菌的出耳平板培养基上划线，再随机挑取另一个金耳单菌落在同一个出耳平板培养基上划线并与上一条线相交，同时接入毛韧革菌液体菌种0.5ml，在出耳平板培养基上摇匀，诱导出耳；19、s7.杂交种培养：20、18～19℃避光培养25～30天，出现幼耳的即为杂交成功。21、优选地，步骤s4中的所述筛选平板培养基配方为：土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g、蛋白胨1g、酵母粉1g、琼脂20g、水1l、氨苄青霉素30mg。22、优选地，步骤s6中的所述出耳平板培养基配方为：土豆200g、蔗糖20g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g、蛋白胨1g、酵母粉1g、琼脂20g、水1l。23、优选地，步骤s6中所述毛韧革菌液体菌种的制备方法为：1)配置并灭菌液体培养基，液体培养基配方为：葡萄糖20g、酵母粉3g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g；2)把毛韧革菌母种、灭好菌的液体培养基、接种工具等放入超净工作台紫外灭菌15分钟；3)点燃酒精灯，在火焰前方打开母种平板，用解剖刀划碎1cm2大小的母种，把划碎的母种放入液体培养基中；4)磁力搅拌培养液体菌种，23℃避光培养5天即可。24、(三)有益效果25、本发明提供了一种金耳孢子育种方法。与现有技术相比，具备以下有益效果：现有的采用单孢分离法，在显微镜下操作分离，该方法操作要求高，且培育步骤繁琐，培育时间长，无法满足实际的生产需要。本发明的金耳孢子育种方法，先直接悬吊培养金耳子实体，待金耳子实体出孢后将孢子收集，再在筛选平板培养基上单独培养孢子，然后通过不同菌落杂交育种的方式培养新的菌种，再诱导出耳，培育时间大幅缩短，操作简单、对设备的要求低，可以满足实际的工厂化生产需要。技术特征：1.一种金耳孢子育种方法，其特征在于，所述方法为：将金耳子实体悬勾培养，待子实体中的孢子分离出后，将孢子移入灭菌的筛选平板培养基上培养出金耳单菌落，随机挑取两个金耳单菌落在同一个灭菌出耳平板培养基上划出相交线进行杂交培养，同时接入毛韧革菌液体菌种作为发菌辅助，在培养基上涂布均匀，诱导出耳。2.如权利要求1所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，具体步骤为：3.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s4中的所述筛选平板培养基配方为：土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g、蛋白胨1g、酵母粉1g、琼脂20g、水1l、氨苄青霉素30mg。4.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s6中的所述出耳平板培养基配方为：土豆200g、蔗糖20g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g、蛋白胨1g、酵母粉1g、琼脂20g、水1l。5.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s6中所述毛韧革菌液体菌种的制备方法为：1)配置并灭菌液体培养基；2)把毛韧革菌母种、灭好菌的液体培养基、接种工具等放入超净工作台紫外灭菌15分钟；3)点燃酒精灯，在火焰前方打开母种平板，用解剖刀划碎1cm2大小的母种，把划碎的母种放入液体培养基中；4)磁力搅拌培养液体菌种，23℃避光培养5天即可。6.如权利要求5所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，所述液体培养基配方为：葡萄糖20g、酵母粉3g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g。7.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s1中的所述消毒方法为：在金耳子实体表面均匀喷洒酒精进行消毒。8.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s2中所述蒸馏水含量为20ml，所述培养瓶容量为500ml。9.如权利要求2所述的金耳孢子育种方法，其特征在于，步骤s3中对超净工作台的消毒方法为：使用紫外灯照射15min进行消毒。技术总结本发明提供一种金耳孢子育种方法，涉及食用菌栽培技术领域。育种方法为：将金耳子实体悬勾培养，待子实体中的孢子分离出后，将孢子移入平板培养基上培养出金耳单菌落，随机挑取两个金耳单菌落在同一个洁净平板培养基上划出相交线进行杂交培养，同时接入毛韧革菌液体菌种作为发菌辅助，在培养基上涂抹均匀，诱导出耳。本发明的育种方法解决了现有培育方法操作复杂、步骤繁琐、对设备的要求高、培育时间长的技术问题，实现了孢子培养速度快、操作简单、设备要求低、可满足工厂化生产需求的技术效果。技术研发人员：许天修,冯剑峰受保护的技术使用者：东至河水山科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/3/27