一种宁夏枸杞果肉愈伤组织诱导培养基及其诱导

本发明涉及组织培养技术，具体而言，涉及一种宁夏枸杞果肉愈伤组织诱导培养基及其诱导增殖培养方法。背景技术：1、宁夏枸杞属于茄科的多年生灌木植物，原产于中国北部。其叶、根和果实(俗称枸杞子)均被广泛应用于传统中医中。宁夏枸杞果实含有枸杞多糖、类黄酮和类胡萝卜素等多种抗氧化活性次生代谢物。这些成分在提高免疫力、抗炎、抗肿瘤和调节血糖水平等方面有显著的健康效益。此外，这些成分使宁夏枸杞在食品、医药保健和化妆品行业中具有广泛的应用潜力。2、宁夏枸杞的栽培需要适量的灌溉。然而，在宁夏地区干旱少雨且水资源稀缺的情况下，过度灌溉可能导致土壤盐渍化，从而影响枸杞的生长和品质。枸杞在生长过程中容易受到病虫害(如枸杞叶螨、枸杞红蜘蛛和枸杞黑斑病)和极端气候的影响。春季，偶尔的晚霜和低温可能损害嫩苗。夏季，虽然高温和充足的阳光有利于果实成熟，但过高的温度或极端干旱也可能造成水分胁迫。秋季是收获季节，但过早的霜冻或过量降雨可能损害果实。冬季，枸杞进入休眠，适当的低温有利于次年的生长，但极端寒冷或缺乏适当的管理措施可能导致植株受损。3、因此，开发一种不受季节限制的宁夏枸杞果实生物反应器显得极为重要。4、愈伤组织作为一种常用的试验材料，在基因工程研究中扮演着不可或缺的角色。它是指外植体在离体培养条件下形成的一团无极性、能旺盛分裂的薄壁细胞团，可以通过诱导分化发育成完整的再生植株。5、在宁夏枸杞生物技术研究中，建立一个稳定的诱导增殖体系是基因遗传转化实验的基础。目前，宁夏枸杞组织培养技术主要集中于幼嫩茎段、叶片和子叶的再生体系，这些体系已相对成熟，适用于基因转化实验。然而，它们并不适用于研究宁夏枸杞果实品质相关的基因，这一缺陷限制了对宁夏枸杞果实的全面研究。6、为了克服这一限制，建立以宁夏枸杞果肉为外植体的再生和遗传转化体系至关重要。通过这一体系，可以深入研究果实品质相关的基因，如营养成分、风味、色泽和储存寿命。此外，通过基因工程手段改良果实品质，不仅可以增强宁夏枸杞的商业价值和竞争力，还对提高农业产量、促进农业可持续发展以及满足消费者对高品质农产品的需求具有重要意义。7、现有技术cn 116636460a公开了一种高抗氧化活性的宁夏枸杞愈伤组织诱导培养基，所述愈伤组织诱导培养基为ms培养基+0.25-4mg/lnaa+0.125-2mg/l6-ba，其中，naa与6-ba的质量比为2：1。8、现有技术cn 111226797a公开了一种黑果枸杞组织培养方法，包括以下步骤：(1)所述黑果枸杞种子的处理方法，包括：将采集后风干、贮存在4℃冷藏条件下的黑果枸杞果实用清水浸泡，充分揉搓果实直至果肉与种子分离，用清水漂洗数次。9、cn 116606880a公开了一种利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其中固体ms培养基：4.43g/l ms(murashige&skoog 15basal medium with vitamins)、30.0g/lsucrose(蔗糖)、0.5g/l mes(吗啉乙磺酸)和8.0g/l agar powder(琼脂粉)，调ph至5.8-6.0。10、cn 106962193 a公开了一种适用于不同种源的黑果枸杞的高效快速繁殖方法，其中培养基条件为：ms+蔗糖30g/l+琼脂7.5g/l+iba0.25mg/l。11、通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为(1)在宁夏枸杞组织培养技术领域中，叶片、幼嫩茎段和子叶的再生体系较成熟，然而其材料不适用于宁夏枸杞果实品质相关基因的研究；(2)现有技术中缺少以宁夏枸杞果肉为外植体的遗传转化体系，极大地限制了枸杞果实品质、果实基因发育等方面的研究。12、愈伤组织在植物分子生物学和基因工程中扮演着至关重要的角色，作为进行基因转化实验的常用材料，其研究对于植物科学的发展有着不可忽视的影响。在宁夏枸杞的研究领域中，尽管愈伤组织技术得到了广泛应用，但针对宁夏枸杞果肉愈伤组织的研究仍是一个未被充分探索的领域。目前，宁夏枸杞果肉愈伤组织的遗传转化方法还未得到充分的发展，这限制了对其分子生物学特性的深入理解。鉴于果实品质和发育机理研究的重要性，本发明旨在通过诱导宁夏枸杞果肉的愈伤组织，来填补这一研究空白。技术实现思路1、本发明首先提供了一种宁夏枸杞果肉愈伤组织诱导培养基，所述培养基包含ms，蔗糖，琼脂，6-ba，2,4-d。2、优选的，所述培养基的ph为5.0～6.0。3、优选的，所述培养基包含ms 4.5～4.8g，蔗糖20g～30g，琼脂5～8g，6-ba 0.4～1.5mg，2,4-d 1.4～2.8mg。4、优选的，所述所述培养基包含ms4.5 g，蔗糖30g，琼脂8g，6-ba1.0 mg，2,4-d为2.5mg。5、本发明还提供了一种上述的培养基的应用，所述应用为制备或构建宁夏枸杞愈伤组织；任选地所述宁夏枸杞愈伤组织使用果肉进行诱导。6、本发明还提供了一种宁夏枸杞果肉愈伤组织的诱导方法，所述方法包括如下步骤：使用上述的培养基诱导宁夏枸杞果肉的步骤。7、本发明还提供了一种宁夏枸杞果肉愈伤组织的诱导方法，所述方法包括如下步骤：8、(1)外植体的选择；9、(2)外植体处理；10、(3)准备上述的培养基；11、(4)外植体培养。12、优选的，所述(1)外植体的选择为选择花期后5～29天无病虫害的健康果实，供试品种宁杞1号。13、优选的，所述(2)外植体处理为将采后新鲜的宁夏枸杞的带柄流水清洗，之后去除果柄并用蒸馏水冲洗，转移到无菌环境中，用酒精消毒后用无菌水中清洗，之后采用汞消毒，采用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干表面水分；消毒完成后使用手术刀去皮，剥离种子，将果肉切成薄片。14、优选的，所述(5)外植体培养为在温度25～28℃的培养箱中避光黑暗培养。15、本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：16、(1)培育宁夏枸杞果肉愈伤组织，这不仅为宁夏枸杞的分子生物学和基因工程研究提供了一种新的实验材料，同时也特别适宜于宁夏枸杞果肉品质相关基因的分子机制研究。17、(2)通过建立宁夏枸杞果肉愈伤组织体系，我们可以获得基因型一致且能够稳定生长的愈伤组织。此外，我们还将探索快速且稳定的宁夏枸杞果肉愈伤组织遗传转化方法，为宁夏枸杞果实的分子生物学研究奠定坚实基础。18、(3)本发明的培养基激素配比能诱导产生更多的愈伤组织，提高整体诱导效率，还有助于提升愈伤组织的质量，精确控制的环境条件有助于保持果实愈伤的生长稳定性，减少批次之间的差异，使其更适合后续的宁夏枸杞再生或遗传工程应用。技术特征：1.一种宁夏枸杞果肉愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述培养基包含ms，蔗糖，琼脂，6-ba，2,4-d。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的ph为5.0-6.0。3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包含ms 4.5-4.8g，蔗糖30g，琼脂8g，6-ba 0.5-1.5mg，2,4-d 1.5-3.0mg。4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述所述培养基包含ms 4.5g，蔗糖30g，琼脂8g，6-ba 1.0mg，2,4-d 2.5mg。5.一种如权利要求1-4任一所述的培养基的应用，其特征在于，所述应用为制备或构建宁夏枸杞愈伤组织；任选地所述宁夏枸杞愈伤组织使用果肉进行诱导。6.一种宁夏枸杞果肉愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：使用权利要求1-4任一所述的培养基诱导宁夏枸杞果肉的步骤。7.一种宁夏枸杞果肉愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：8.根据权利要求7所述的诱导方法，其特征在于，所述(1)外植体的选择为选择花期后5-29天无病虫害的健康果实，供试品种宁杞1号。9.根据权利要求7所述的诱导方法，其特征在于，所述(2)外植体处理为将采后新鲜的宁夏枸杞的带柄流水清洗，之后去除果柄并用蒸馏水冲洗，转移到无菌环境中，用酒精消毒后用无菌水中清洗，之后采用汞消毒，采用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干表面水分；消毒完成后使用手术刀去皮，剥离种子，将果肉切成薄片。10.根据权利要求7所述的诱导方法，其特征在于，所述(5)外植体培养为在温度25-28℃的培养箱中避光黑暗培养。技术总结本发明公开了一种宁夏枸杞果肉愈伤组织诱导培养基及其诱导增殖培养方法，其特征在于，所述培养基包含MS，蔗糖，琼脂，6‑BA，2,4‑D。所述诱导使用宁夏枸杞果肉进行诱导。本发明培育宁夏枸杞果肉愈伤组织，为宁夏枸杞的分子生物学和基因工程研究提供了一种新的实验材料。此外，本发明还将探索快速且稳定的宁夏枸杞果肉愈伤组织遗传转化方法，为宁夏枸杞果实的分子生物学研究奠定坚实基础。最后，本发明的培养基激素配比能诱导产生更多的愈伤组织，提高整体诱导效率，还有助于提升愈伤组织的质量，精确控制的环境条件有助于保持果实愈伤的生长稳定性，减少批次之间的差异，使其更适合后续的宁夏枸杞再生或遗传工程应用。技术研发人员：陈金焕,王玉昌,王鸿睿受保护的技术使用者：北京林业大学技术研发日：技术公布日：2024/3/24