一组在酵母细胞中表达蛋白的载体、细胞器定位

本发明属于生物，具体涉及一组在酵母细胞中表达蛋白的载体、细胞器定位系统及其应用。背景技术：1、基因功能分析是功能基因组学领域中的一个重要研究内容，明确目的基因在细胞中工作的细胞器可为探究目的基因功能提供有效线索。2、现有技术多用荧光蛋白亚细胞定位，例如在植物荧光蛋白亚细胞定位的研究中，常常将目的基因与荧光蛋白融合后构建表达质粒，接着使用农杆菌注射烟草表皮，原生质体瞬时转化，洋葱表皮细胞基因枪轰击和农杆菌侵染稳定转化等实验，以此实现在细胞体内表达荧光蛋白进而研究目的蛋白质在细胞中定位的目的。然而，上述实验均存在一些限制因素，如烟草表皮细胞注射结果受烟草生长状态影响较大；原生质体对转化质粒的浓度和质量要求较高；农杆菌侵染稳定转化实验耗时较长等。因此，现有的荧光蛋白亚细胞定位实验存在耗费时间长且易因质粒的不稳定而导致实验结果不准确的问题。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一组在酵母细胞中表达蛋白的载体、细胞器定位系统及其应用，该方案不仅操作简便且准确度高。2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：3、本发明提供了一组在酵母中表达蛋白的载体，所述载体包括第一载体和第二载体；所述第一载体包括编码第一荧光蛋白的核苷酸序列和第一基础载体；所述第二载体包括编码第二荧光蛋白的核苷酸序列和第二基础载体；所述第一荧光蛋白和第二荧光蛋白为具有不同颜色的荧光蛋白；所述第一基础载体和第二基础载体分别包括能够在酵母中表达的载体。4、优选的，所述第一荧光蛋白包括绿色荧光蛋白gfp；编码所述绿色荧光蛋白gfp的核苷酸序列优选如seq id no.41所示；所述第二荧光蛋白包括红色荧光蛋白dsred2；编码所述红色荧光蛋白dsred2的核苷酸序列seq id no.42所示。5、优选的，所述第一载体包括pgbk-gfp；所述第二载体包括pgad-red。6、本发明提供了用于构建上述技术方案所述载体的引物组，包括：pgad-red-f、pgad-red-r、pgbkt7-donor-f、pgbkt7-donor-r、pgbk-gfp-f和pgbk-gfp-r；所述pgbkt7-donor-f的核苷酸序列如seq id no.27所示；所述pgbkt7-donor-r的核苷酸序列如seq idno.28所示；所述pgbk-gfp-f的核苷酸序列如seq id no.29所示；所述pgbk-gfp-r的核苷酸序列如seq id no.30所示。7、本发明提供了一种细胞器定位系统，包括上述技术方案所述载体或所述引物组构建的载体，以及含有酵母细胞器marker基因的重组质粒。8、优选的，所述酵母细胞器marker基因包括：elo3基因、anp1基因、cox4基因、pex3基因、nab2基因、chs5基因、vhc1基因、vps4基因、tgl3基因、ccr4基因、pho5基因和ybl029c-a基因中的一种或多种。9、优选的，所述重组质粒包括：pgad-elo3-red质粒、pgad-anp1-red质粒、pgad-cox4-red质粒、pgad-pex3-red质粒、pgad-nab2-red质粒、pgad-chs5-red质粒、pgad-vhc1-red质粒、pgad-vps4-red质粒、pgad-tgl3-red质粒、pgad-ccr4-red质粒、pgad-pho5-red质粒和pgad-ybl029c-a-red质粒中的一种或多种。10、本发明提供了上述技术方案所述的载体、所述的引物组或所述的细胞器定位系统在蛋白定位中的应用。11、本发明提供了一种基于酵母体系进行蛋白质定位的方法，包括如下步骤：将pgad-red载体和pgbk-gfp载体分别进行酶切，得到酶切后的pgad-red和酶切后的pgbk-gfp；将酵母细胞器marker基因进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；将所述pcr扩增产物与酶切后的pgad-red进行同源重组，得到pgad-marker-red；将待测基因与酶切后的pgbk-gfp进行同源重组，得到pgbk-待测基因-gfp；将所述pgbk-待测基因-gfp与pgad-marker-red共转染至酵母中进行培养，并对培养后的酵母细胞进行发光检测；当所述酵母细胞中的同一位置同时有绿色荧光信号和红色荧光信号时，则待测基因与细胞器marker基因的所在位置相同；当所述培养物同一位置仅有绿色荧光信号或红色荧光信号时，则待测基因与细胞器marker基因的所在位置不同；所述酵母细胞器marker基因包括：elo3基因、anp1基因、cox4基因、pex3基因、nab2基因、chs5基因、vhc1基因、vps4基因、tgl3基因、ccr4基因、pho5基因和ybl029c-a基因中的一种或多种。12、优选的，进行所述pcr扩增时的引物包括：扩增所述elo3基因的上游引物pgad-elo3-red-f的核苷酸如seq id no.3所示；扩增所述elo3基因的下游引物pgad-elo3-red-r的核苷酸如seq id no.4所示；扩增所述anp1基因的上游引物pgad-anp1-red-f的核苷酸如seq id no.5所示；扩增所述anp1基因的下游引物pgad-anp1-red-r的核苷酸如seq idno.6所示；扩增所述cox4基因的上游引物pgad-cox4-red-f的核苷酸如seq id no.7所示；扩增所述cox4基因的下游引物pgad-cox4-red-r的核苷酸如seq id no.8所示；扩增所述pex3基因的上游引物pgad-pex3-red-f的核苷酸如seq id no.9所示；扩增所述pex3基因的下游引物pgad-pex3-red-r的核苷酸如seq id no.10所示；扩增所述nab2基因的上游引物pgad-nab2-red-f的核苷酸如seq id no.11所示；扩增所述nab2基因的下游引物pgad-nab2-red-r的核苷酸如seq id no.12所示；扩增所述chs5基因的上游引物pgad-chs5-red-f的核苷酸如seq id no.13所示；扩增所述chs5基因的下游引物pgad-chs5-red-r的核苷酸如seq id no.14所示；扩增所述vhc1基因的上游引物pgad-vhc1-red-f的核苷酸如seq idno.15所示；扩增所述vhc1基因的下游引物pgad-vhc1-red-r的核苷酸如seq id no.16所示；扩增所述vps4基因的上游引物pgad-vps4-red-f的核苷酸如seq id no.17所示；扩增所述vps4基因的下游引物pgad-vps4-red-r的核苷酸如seq id no.18所示；扩增所述tgl3基因的上游引物pgad-tgl3-red-f的核苷酸如seq id no.19所示；扩增所述tgl3基因的下游引物pgad-tgl3-red-r的核苷酸如seq id no.20所示；扩增所述ccr4基因的上游引物pgad-ccr4-red-f的核苷酸如seq id no.21所示；扩增所述ccr4基因的下游引物pgad-ccr4-red-r的核苷酸如seq id no.22所示；扩增所述pho5基因的上游引物pgad-pho5-red-f的核苷酸如seq id no.23所示；扩增所述pho5基因的下游引物pgad-pho5-red-r的核苷酸如seq idno.24所示；扩增所述ybl029c-a基因的上游引物pgad-ybl029c-a-red-f的核苷酸如seq idno.25所示；扩增所述ybl029c-a基因的下游引物pgad-ybl029c-a-red-r的核苷酸如seq idno.26所示。13、有益效果：14、本发明提供了一组在酵母中表达蛋白的载体，所述载体包括第一载体和第二载体；所述第一载体包括编码第一荧光蛋白的核苷酸序列和第一基础载体；所述第二载体包括编码第二荧光蛋白的核苷酸序列和第二基础载体；所述第一荧光蛋白和第二荧光蛋白为具有不同颜色的荧光蛋白；所述第一基础载体和第二基础载体分别包括能够在酵母中表达的载体。通过利用编码不同颜色的荧光蛋白的核苷酸序列与能够在酵母中表达的基础载体构建对应的载体，有利于得到特异性且高效在酵母中表达的载体，以保障样本性能的稳定性，提升定位结果的准确性。15、基于上述优势，本发明进一步提供了一种细胞器定位系统及其在蛋白质定位中的应用。本发明将编码不同荧光蛋白片段的基因序列载体分别重组到细胞器marker和目的基因中，通过在酵母细胞中检测荧光信号共定位与否，进而能够确定目的基因的工作细胞器。实验证明，采用本发明提供的技术方案后，不仅操作简便节省时间，还能准确的对目的基因进行定位。